产品货号：
SYA200
中文名称：
诺如病毒(NV)通用单重荧光PCR检测试剂盒
英文名称：
产品规格：
48次/盒
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
一、简介：
本试剂盒针对诺如病毒通用型高度保守区域设计特异性引物和探针，在反应体系中含诺如病毒通用型基因组模板的情况下，PCR反应得以进行并释放荧光信号。利用仪器对PCR过程中相应通道的信号强度进行实时监测和输出，实现检测结果的定性分析。
二、用途：
诺如病毒(Norwalk Viruses，NV)是人类杯状病毒科(Human Calicivirus，HuCV)中诺如病毒(Norovirus,NV)属的原型代表株。有5个基因群(Gene group G)GI、GII、GIII、GIV、GV。诺如病毒感染性腹泻在全世界范围内均有流行，全年均可发生感染，感染对象主要是成人和学龄儿童，寒冷季节呈现高发。
三、试剂盒组成：(50T/Kit)
组份 数量 规格
RT-PCR反应液(NV-qRT-PCR MIX) 1管 672μL/管
酶混合物(Enzymes MIX) 1管 48μL/管
无核酸酶水(Nuclease-Free Water) 1管 500μL/管
阴性对照(NTC) 1管 50μL/管
阳性对照(NV-PTC) 1管 50μL/管
四、储存条件及有效期：
本试剂盒于-20℃以下保存，有效期为6个月。
五、荧光PCR仪器适用范围：
ABI系列，伯乐系列，Roche系列等荧光定量PCR检测仪等。
六、样品的采集与RNA提取
6.1 样品的采集
1. 采集时间：粪便样本应在发病首日采集，至多不能超过发病急性期(48～72h)，此时为稀、软便，病毒排出量最多。
2. 采集方法
(1)一次流行，至少采集10例患者粪便，每份样本量约1～5mL，成形便和肛拭子诊断意义很小；
(2)病人呕吐物是粪便样本的最佳补充，有助于病原的诊断。采集、储存和运送条件同于粪便；
(3)从流行病学角度出发，在水、食物或其它外环境样本中检出NV意义重要；
(4)需注意检测技术要锁定在高度怀疑的传播媒介上，尽早采样并置4℃存放，若是饮用水，需用大容量(5～100L)浓集病毒后检测；
3.应避免样本间交叉污染。
4.样本收集后可立即检测；若不能立即检测，可置于-20℃以下过夜保存；如需长期保存，样本应冻存于-70℃以下，避免反复冻融。
6.2 RNA提取
可采购北京百奥莱博科技有限公司的RNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品，并按照相应试剂盒说明进行操作。
注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议最后在样品制备区域加入阳性对照。
七、检测步骤：
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光qRT-PCR反应液(NV-qRT-PCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1µL
总量 15µL N×15µL
计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL，向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(NV-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qRT-PCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
反转录(Reverse Transcription) 1循环 45℃ for 10 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 45 sec
在55℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM，淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。
八、结果分析：
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
（1） 阴性对照(NTC)：不应产生任何的扩增曲线。
（2） 阳性对照(NV-PTC)：均产生扩增曲线。
（3） 以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效。
8.3 结果判定
（1） 在试验成立的条件下，Ct值≤35的样本为阳性，表明NV核酸阳性。
（2） Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明NV核酸阴性。
（3） 如果35＜Ct值≤40，判为可疑样品。对于可疑样品，先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线，则为可疑阳性，否则判为阴性。
（4） 对于可疑阳性样品，重新抽提核酸，再次进行NV qRT-PCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明NV核酸阳性；否则判为样本阴性。
九、注意事项：
（1） 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
（2） 所有使用的离心管最好高压灭菌，而且必须不含RNA酶。
（3） PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等)，防止实验室污染。
（4） 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
（5） 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
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本试剂盒针对诺如病毒通用型高度保守区域设计特异性引物和探针，在反应体系中含诺如病毒通用型基因组模板的情况下，PCR反应得以进行并释放荧光信号。利用仪器对PCR过程中相应通道的信号强度进行实时监测和输出，实现检测结果的定性分析。
二、用途：
诺如病毒(Norwalk Viruses，NV)是人类杯状病毒科(Human Calicivirus，HuCV)中诺如病毒(Norovirus,NV)属的原型代表株。有5个基因群(Gene group G)GI、GII、GIII、GIV、GV。诺如病毒感染性腹泻在全世界范围内均有流行，全年均可发生感染，感染对象主要是成人和学龄儿童，寒冷季节呈现高发。
三、试剂盒组成：(50T/Kit)
组份 数量 规格
RT-PCR反应液(NV-qRT-PCR MIX) 1管 672μL/管
酶混合物(Enzymes MIX) 1管 48μL/管
无核酸酶水(Nuclease-Free Water) 1管 500μL/管
阴性对照(NTC) 1管 50μL/管
阳性对照(NV-PTC) 1管 50μL/管
四、储存条件及有效期：
本试剂盒于-20℃以下保存，有效期为6个月。
五、荧光PCR仪器适用范围：
ABI系列，伯乐系列，Roche系列等荧光定量PCR检测仪等。
六、样品的采集与RNA提取
6.1 样品的采集
1. 采集时间：粪便样本应在发病首日采集，至多不能超过发病急性期(48～72h)，此时为稀、软便，病毒排出量最多。
2. 采集方法
(1)一次流行，至少采集10例患者粪便，每份样本量约1～5mL，成形便和肛拭子诊断意义很小；
(2)病人呕吐物是粪便样本的最佳补充，有助于病原的诊断。采集、储存和运送条件同于粪便；
(3)从流行病学角度出发，在水、食物或其它外环境样本中检出NV意义重要；
(4)需注意检测技术要锁定在高度怀疑的传播媒介上，尽早采样并置4℃存放，若是饮用水，需用大容量(5～100L)浓集病毒后检测；
3.应避免样本间交叉污染。
4.样本收集后可立即检测；若不能立即检测，可置于-20℃以下过夜保存；如需长期保存，样本应冻存于-70℃以下，避免反复冻融。
6.2 RNA提取
可采购北京百奥莱博科技有限公司的RNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品，并按照相应试剂盒说明进行操作。
注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议最后在样品制备区域加入阳性对照。
七、检测步骤：
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光qRT-PCR反应液(NV-qRT-PCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1µL
总量 15µL N×15µL
计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL，向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(NV-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qRT-PCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
反转录(Reverse Transcription) 1循环 45℃ for 10 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 45 sec
在55℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM，淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。
八、结果分析：
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
（1） 阴性对照(NTC)：不应产生任何的扩增曲线。
（2） 阳性对照(NV-PTC)：均产生扩增曲线。
（3） 以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效。
8.3 结果判定
（1） 在试验成立的条件下，Ct值≤35的样本为阳性，表明NV核酸阳性。
（2） Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明NV核酸阴性。
（3） 如果35＜Ct值≤40，判为可疑样品。对于可疑样品，先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线，则为可疑阳性，否则判为阴性。
（4） 对于可疑阳性样品，重新抽提核酸，再次进行NV qRT-PCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明NV核酸阳性；否则判为样本阴性。
九、注意事项：
（1） 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
（2） 所有使用的离心管最好高压灭菌，而且必须不含RNA酶。
（3） PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等)，防止实验室污染。
（4） 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
（5） 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
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