产品货号：
BTN15-87810
中文名称：
人类嗜T淋巴细胞病毒1型(HTLV-1)荧光定量RT-PCR试剂盒(探针法)
英文名称：
Human T-cell Lymphoma Virus 1 RT-qPCR Kit(Probe Method)
产品规格：
50次
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
本制品是以探针法荧光定量PCR技术为基础开发的HTLV-I病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒。
保存：-20℃，有效期二年。
引物-探针干粉在使用前需要短暂离心，然后在离心管中加入162μL的超纯水充分混匀后再使用，未用完的需要-20℃保存。
一、稀释标准曲线样品(以101～106拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)。
由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本制品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。
二、样品RNA的制备
三、Probe qRT-PCR反应(20μL体系，在样品制备室进行)
四、数据处理
相关搜索：人类嗜T淋巴细胞病毒1型(HTLV-1)荧光定量RT-PCR试剂盒(探针法)，人类嗜T淋巴细胞病毒1型探针法qRT-PCR试剂盒
人类嗜T淋巴细胞病毒1型(Human T-lymphotropic Virus 1，HTLV 1)主要感染人CD4+T淋巴细胞，可引起成人T淋巴细胞白血病/淋巴瘤、HTLV相关脊髓病(HTLV-I associated myelopathy，HAM/热带痉挛性下肢瘫，tropical spastic paraparesis TSP)及色素层炎。它主要通过输血、针头、性行为、母子传染。因此快速检测HTLV-I病毒具有重要的意义。
- 即开即用，用户只需要提供样品RNA模板。
- 引物和探针经过优化，分析灵敏性高，可以达到100拷贝/反应。
- 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
- 特异性高，引物是根据人类嗜T淋巴细胞病毒1型RNA高度保守区设计，不会跟其他病毒的RNA发生交叉反应。
- 既可用于定性检测，又可用于定量检测。用于定量检测时线性范围至少为5个数量级。
- 本制品足够50次20μL体系的探针法荧光定量RT-PCR反应。
- 本制品只能用于科研。
| 组分 | 规格 |
| 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500μL |
| 探针法qRT-PCR酶混合液v2 | 50μL |
| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1mL |
| 人类嗜T淋巴细胞病毒1型探针法qRT-PCR引物-探针干粉 | 50次 |
| 人类嗜T淋巴细胞病毒1型探针法qRT-PCR阳性对照(1×107拷贝/μL) | 50μL |
保存：-20℃，有效期二年。
引物-探针干粉在使用前需要短暂离心，然后在离心管中加入162μL的超纯水充分混匀后再使用，未用完的需要-20℃保存。
一、稀释标准曲线样品(以101～106拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)。
由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本制品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。
- 标记6个离心管，分别为6，5，4，3，2，1。
- 用带芯枪头分别加入45μL荧光RT-PCR专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同。
- 在6号管中加入5μL 1×107拷贝/μL的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1×106拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 换枪头，在5号管中加入5μL 1×106拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×105拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 换枪头，在4号管中加入5μL 1×105拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×104拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品RNA的制备
- 如果有N个样品，最好设置N+2个提取，多出的是PC(样品制备阳性对照)和NC(样品制备阴性对照)。可以取上步所得的第4号稀释液10μL再加上一定量的水，使总体积与核酸纯化试剂盒所要求的起始样品体积一致，以此作为PC。另外用水作为NC。
- 用自选方法纯化样品的RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒RNA提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的免提取核酸释放剂。
三、Probe qRT-PCR反应(20μL体系，在样品制备室进行)
- 如果做定量分析并且只做1次重复，则标记N+9个RT-PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于RT-PCR阴性对照(用水做模板)，6个用于标准曲线。如果做定性分析并且只做1次重复，则标记N+4个RT-PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于RT-PCR阴性对照(用水做模板)，1个用于RT-PCR阳性对照(用第4号管的阳性对照稀释液做模板)。下面只以定量分析为例描述操作步骤。
- 在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加)：
成分 样品管
N+2个RT-PCR
阴性对照标准曲线样品管
(1～6管)探针法qRT-PCR缓冲液 各10μL 10μL 各10μL 探针法qRT-PCR酶混合液v2 各1μL 1μL 各1μL 人类嗜T淋巴细胞病毒1型qRT-PCR引物-探针混合液 各3μL 3μL 各3μL N+2个待测RNA样本 各6μL 不加 不加 超纯水 不加 6μL 不加 第6步所得标准曲线样品稀释液(1～6号) 不加 不加 各6μL - 盖上盖子后上机，按下面参数进行RT-PCR：
过程 温度 时间 逆转录 50℃ 10min 预变性 95℃ 10min RT-PCR反应
(45个循环)95℃ 15sec 60℃ 60sec(采集FAM通道的荧光信号，淬灭基团为BHQ)
四、数据处理
- 如果样本制备阳性对照或PCR阳性对照(包括标曲样本)结果为阴性，则整个实验无效，不需要分析数据，需要重新样本制备，重新进行PCR扩增或跟厂家联系。如果样本制备阴性对照或PCR阴性对照结果为阳性，说明环境污染，则整个实验无效，不需要分析数据，需要跟厂家联系。
- 如果阴性对照和阳性对照均正常，则实验有效，可以进入后续分析。
- 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品RNA浓度的log值，再推算出其浓度。
- 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照必须没有Ct，或者Ct大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于或等于40。对待测样品，如果其Ct小于40则为阳性，如果没有Ct，或者Ct大于或等于40则为阴性。
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