产品货号：
BTN15-71100
中文名称：
猴D型逆转录病毒(SRV)荧光定量RT-PCR试剂盒(探针法)
英文名称：
Simian Type-D Retrovirus RT-qPCR Kit(Probe Method)
产品规格：
50次
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本产品是以探针法荧光定量RT-PCR技术为基础开发的专门检测猴D型逆转录病毒的试剂盒。
猴D型逆转录病毒(Simian Type-D Retrovirus，SRV)，是猴获得性免疫缺陷综合征即猴艾滋病的主要病原体之一。SRV感染临床上表现为顽固性腹泻、体重减轻、全身性淋巴腺病、脾肿大、贫血、慢性感染并对治疗不产生疗效反应、中性白细胞减少、淋巴细胞减少、坏死性口炎、腹膜后纤维瘤病等，因此快速灵敏诊断猴D型逆转录病毒具有重要意义。
保存：-20℃，有效期一年。
一、稀释标准曲线样品(以101～106拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)。
由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。
如果需要RNA阳性样品，需要另外订购。
二、样品RNA的制备
三、Probe qRT-PCR反应(20μL体系，在样品制备室进行)
四、数据处理
相关搜索：猴D型逆转录病毒(SRV)荧光定量RT-PCR试剂盒(探针法)，猴D型逆转录病毒荧光定量RT-PCR试剂盒
猴D型逆转录病毒(Simian Type-D Retrovirus，SRV)，是猴获得性免疫缺陷综合征即猴艾滋病的主要病原体之一。SRV感染临床上表现为顽固性腹泻、体重减轻、全身性淋巴腺病、脾肿大、贫血、慢性感染并对治疗不产生疗效反应、中性白细胞减少、淋巴细胞减少、坏死性口炎、腹膜后纤维瘤病等，因此快速灵敏诊断猴D型逆转录病毒具有重要意义。
- 即开即用，用户只需要提供样品RNA模板。
- 引物和探针经过优化，分析灵敏性高，可以达到1000拷贝/反应。
- 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
- 特异性高，引物是根据猴D型逆转录病毒RNA高度保守区设计，不会跟其他生物的RNA发生交叉反应。
- 既可用于定性检测，又可用于定量检测。用于定量检测时线性范围至少为5各数量级。
- 本产品足够50次20μL体系的探针法qRT-PCR反应。
- 本产品只能用于科研。
| 组分 | 规格 |
| 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500μL |
| 探针法qRT-PCR酶混合液 | 100μL |
| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1mL |
| 猴D型逆转录病毒qRT-PCR引物-探针混合液 | 150μL |
| 猴D型逆转录病毒RT-PCR阳性对照(1×107拷贝/μL) | 50μL |
保存：-20℃，有效期一年。
一、稀释标准曲线样品(以101～106拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)。
由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。
如果需要RNA阳性样品，需要另外订购。
- 标记6个离心管，分别为6，5，4，3，2，1。
- 用带芯枪头分别加入45μL荧光PCR专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同)。
- 在6号管中加入5μL 1×107拷贝/μL的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1×106拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 换枪头，在5号管中加入5μL 1×106拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×105拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 换枪头，在4号管中加入5μL 1×105拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×104拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品RNA的制备
- 如果有N个样品，最好设置N+2个提取，多出的一个是PC(样品制备阳性对照)，一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL上步所得4号稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次核酸纯化试剂盒所要求的起始样本体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。
- 用自选方法纯化样品的RNA，本试剂盒跟市场上大多数RNA提取试剂盒兼容，也可以选购本公司的免提取核酸释放剂。
三、Probe qRT-PCR反应(20μL体系，在样品制备室进行)
- 如果做定量分析并且只做1次重复，则标记N+9个RT-PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于RT-PCR阴性对照(用水做模板)，6个用于标准曲线。如果做定性分析并且只做1次重复，则标记N+4个RTPCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于RT-PCR阴性对照(用水做模板)，1个用于RT-PCR阳性对照(直接用第6步第4号管的阳性对照稀释液做模板)。下面只以定量分析为例描述操作步骤。
- 在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加)：
成分 样品管
N+2个RT-PCR
阴性对照标准曲线样品管
(1～6管)探针法qRT-PCR缓冲液 各10μL 10μL 各10μL 探针法qRT-PCR酶混合液 各2μL 2μL 各2μL 猴D型逆转录病毒qRT-PCR引物-探针混合液 各3μL 3μL 各3μL N+2个待测RNA样本 各5μL 不加 不加 超纯水 不加 5μL 不加 第6步所得标准曲线样品稀释液(1～6号) 不加 不加 各5μL - 盖上盖子后上机，按下面参数进行RT-PCR：
过程 温度 时间 逆转录 50℃ 15min 预变性 95℃ 3min PCR反应
(37个循环)95℃ 15sec 59℃ 45sec(采集FAM通道的荧光信号，淬灭基团为TAMRA)
四、数据处理
- 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品RNA浓度的log值，再推算出其浓度。
- 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照Ct必须等于或者大于36，或者没有Ct值。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于36。对待测样品，如果其Ct小于36则为阳性。如果在大于或等于36则为阴性。
相关搜索：猴D型逆转录病毒(SRV)荧光定量RT-PCR试剂盒(探针法)，猴D型逆转录病毒荧光定量RT-PCR试剂盒