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山羊痘病毒(GTPV)荧光定量PCR试剂盒(探针法)图片
产品货号:
BTN15-33100
中文名称:
山羊痘病毒(GTPV)荧光定量PCR试剂盒(探针法)
英文名称:
Goatpox Virus qPCR Kit(Probe Method)
产品规格:
50次
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
本产品是以探针法荧光定量PCR技术为基础开发的专门检测山羊痘病毒的试剂盒。


山羊痘病毒(Goat Pox Virus,GPV)属于痘病毒科,羊痘病毒属的一个成员,引起山羊痘(Goat Pox)。山羊痘病毒耐干燥,可在干燥状态下存活几个月,冻融对其没有明显的灭活作用,但对乙醚敏感。羊痘易传播,被怀疑可通过空气悬浮颗粒和昆虫媒介传播。其引起的山羊痘是山羊的一种病毒性疾病,以体温升高、全身性丘疹或结节、水泡(少数)、内脏病变(特别是肺脏)乃至死亡为特征。世界动物卫生组织(OIE)将该病列为A类疾病,我国农业部将山羊痘列为国家一类动物疫病。临床上也有人感染的病例,是一种人畜共患病。因此快速检测山羊痘病毒具有重要的意义。


  1. 即开即用,用户只需要提供样品DNA模板。
  2. 引物和探针经过优化,分析灵敏性高,可以达到100拷贝/μL。
  3. 提供阳性对照,便于区分假阴性样品。
  4. 特异性高,引物是根据山羊痘病毒DNA高度保守区设计,不会跟其他生物的DNA发生交叉反应。
  5. 既可用于定性检测,又可用于定量检测。用于定量检测时线性范围至少为5个数量级。
  6. 本产品足够50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
  7. 本产品只能用于科研。



组分规格
2×Probe qPCR MagicMix500μL
荧光PCR专用模板稀释液1mL
超纯水1mL
山羊痘病毒qPCR引物-探针混合液150μL
山羊痘病毒qPCR阳性对照(1×107拷贝/μL)50μL

保存:-20℃,有效期一年。


一、稀释标准曲线样品(以101~106拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)。
由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。
  1. 标记6个离心管,分别为6,5,4,3,2,1。
  2. 用带芯枪头分别加入45μL荧光PCR专用模板稀释液,最好用带芯枪头,下同)。
  3. 在6号管中加入5μL 1×107拷贝/μL的阳性对照(试剂盒提供),充分震荡1分钟,得1×106拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
  4. 换枪头,在5号管中加入5μL 1×106拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×105拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
  5. 换枪头,在4号管中加入5μL 1×105拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×104拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
  6. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。


二、样品DNA的制备
  1. 如果有N个样品,最好设置N+2个提取,多出的一个是PC(样品制备阳性对照),一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL上步所得4号稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样,以此作为PC。另外用水作为NC。
  2. 用自选方法纯化样品的DNA,本试剂盒跟市场上大多数样品DNA提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的免提取核酸释放剂。


三、Probe qPCR反应(20μL体系,在样品制备室进行)
  1. 如果做定量分析并且只做1次重复,则标记N+9个PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于PCR阴性对照(用水做模板),6个用于标准曲线。如果做定性分析并且只做1次重复,则标记N+4个PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于PCR阴性对照(用水做模板),1个用于PCR阳性对照(直接用第6步第4号管的阳性对照稀释液做模板)。下面只以定量分析为例描述操作步骤。
  2. 在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照,并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加):
    成分样品管
    N+2个
    PCR阴性
    对照
    标准曲线样品管
    (1~6管)
    2×Probe qPCR MagicMix各10μL10μL各10μL
    山羊痘病毒qPCR引物-探针混合液各3μL3μL各3μL
    N+2个待测DNA样本各7μL不加不加
    超纯水不加7μL不加
    第6步所得标准曲线样品稀释液(1~6号)不加不加各7μL

  3. 盖上盖子后上机,按下面参数进行PCR:
    过程温度时间
    预变性95℃3min
    PCR反应
    (45个循环)
    95℃15sec
    60℃30sec(采集FAM通道的荧光信号,设置BHQ1为淬灭基团)


四、数据处理
  1. 如果把本试剂盒用于定量检测,则以阳性对照浓度的log值为横轴,以Ct值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值,再推算出其浓度。
  2. 如果把本试剂盒用于定性检测,只判断阳性或阴性,则阴性对照必须无Ct或者大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长,有典型扩增曲线,Ct值应该小于40,否则实验无效。如果实验有效,则分析待测样品,如果无Ct或者大于或等于40则为阴性,如果Ct小于40则为阳性。




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