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本制品是百奥莱博公司以探针法PCR技术为基础开发的，专门用于13种高危型人乳头瘤病毒研究检测的通用试剂盒。

人乳头瘤病毒(Humanpapillomavirus，HPV)是一种嗜上皮性病毒，能引起宫颈癌，它有100多个亚型，其中13个属于高危型，其余都是低危型。高危型HPV持续感染是宫颈癌等多种恶性肿瘤的病因；因此快速检测这13种高危型的人乳头病毒具有重要意义。

1. 即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。
   
2. 引物和探针经过优化，分析灵敏度高，可以达到100拷贝/反应。
   
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
   
4. 特异性高，引物是根据人乳头瘤病毒DNA高度保守区设计，不会跟其他生物的DNA发生交叉反应。
   
5. 可检测13种高危型HPV，分别是HPV-16、HPV-18、HPV-31、HPV-33、HPV-35、HPV-39、HPV-45、HPV-51、HPV-52、HPV-56、HPV-58、HPV-59和HPV-68。
   
6. 可用于定性检测，不推荐用于定量检测。
   
7. 本制品足够50次20μL体系的探针法荧光PCR反应。
   
8. 本制品只能用于科研。

首次使用本试剂盒前，请将引物-探针干粉管短暂离心，然后加入165μL超纯水，涡旋震荡半分钟混匀，短暂离心后放冰上待用。未用完的本成分需放-20℃保存。

1. 如果有N个样品，最好设置N+2个提取，多出的一个是PC(样品制备阳性对照)，一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL浓度为10⁴拷贝/μL的人乳头瘤病毒13种高危型通用PCR阳性对照再加上一定量的水使总体积跟每次样本制备所要求的起始样本体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。
   
2. 用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数样品DNA提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的免提取核酸释放剂。

3. 做定性分析并且只做1次重复，则标记N+4个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照(用水做模板)，1个用于PCR阳性对照(直接用浓度为10⁴拷贝/μL的人乳头瘤病毒13种高危型通用PCR阳性对照)。
   
4. 在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加)：
   

   成分	样品管 N+2个	PCR阴性 对照	PCR阳性 对照
   2×Probe qPCR MasterMix	各10μL	10μL	10μL
   人乳头瘤病毒13种高危型通用qPCR引物-探针混合液	各3μL	3μL	3μL
   N+2个待测DNA样本	各7μL	不加	不加
   超纯水	不加	7μL	不加
   人乳头瘤病毒13种高危型通用PCR阳性对照(104拷贝/μL)	不加	不加	7μL

5. 盖上盖子后上机，按下面参数进行PCR：
   

   过程	温度	时间
   预变性	95℃	5min
   PCR反应 (45个循环)	95℃	15sec
   	55℃	30sec
   	72℃	30sec*

   注^*：此时采集FAM通道的荧光信号，设置MGB为淬灭基团。

6. 如果样本制备阳性对照或PCR阳性对照结果为阴性，则整个实验无效，不需要分析数据，需要重新样本制备，重新进行PCR扩增或跟厂家联系。如果样本制备阴性对照或PCR阴性对照结果为阳性，说明环境污染，则整个实验无效，不需要分析数据，需要跟厂家联系。
   
7. 如果阴性对照和阳性对照均正常，则实验有效，可以进入后续分析。
   
8. 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照Ct必须没有读数，或者大于或等于36。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于36。对待测样品，如果其Ct没有读数、大于或等于36则均为阴性，如果小于36则为阳性。