产品货号：
BTN15-27100
中文名称：
人类嗜T淋巴细胞病毒前病毒(HTLV)荧光定量PCR试剂盒(探针法)
英文名称：
Human T-cell Lymphoma Virus Provirus qPCR Kit(Probe Method)
产品规格：
50次
发货周期：
1～3天
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本产品是针对此需求而建立的一种检测HTLV前病毒DNA的探针法荧光定量PCR检测方法。
人类嗜T淋巴细胞病毒前病毒(Human T-cell Lymphoma Virus Provirus，HTLV)是一种致瘤性病毒，现该病毒可引起人类多种疾病，如成人T细胞白血病/淋巴瘤(ATL)、热带痉挛性截瘫/HTLV相关性脊髓病等；HTLV-Ⅱ与T-多毛细胞/巨粒细胞白血病等疾病相关，至今尚无有效治疗方法及抗病毒药物。自行缓解慢性型多在诊断明确后几年内死亡，在急性期ATL患者可接受化学治疗，如环磷酰胺多柔比星、长春新碱和泼尼松，但常规治疗收效有限，对人体健康造成严重损害。患者的白血病细胞内有HTLV前病毒DNA的整合，所以HTLV前病毒DNA水平可以作为病毒载量之外的另一标志物。
保存：-20℃，有效期一年。
一、稀释PCR阳性对照(以101～106拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)
如果做定性实验，则此步可以跳过。如果做定量实验，则需要稀释阳性对照做标准曲线。
由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。
二、样品DNA的制备
三、Probe qPCR反应(20μL体系，在样品制备室进行)
四、数据处理
相关搜索：人类嗜T淋巴细胞病毒前病毒(HTLV)荧光定量PCR试剂盒(探针法)
人类嗜T淋巴细胞病毒前病毒(Human T-cell Lymphoma Virus Provirus，HTLV)是一种致瘤性病毒，现该病毒可引起人类多种疾病，如成人T细胞白血病/淋巴瘤(ATL)、热带痉挛性截瘫/HTLV相关性脊髓病等；HTLV-Ⅱ与T-多毛细胞/巨粒细胞白血病等疾病相关，至今尚无有效治疗方法及抗病毒药物。自行缓解慢性型多在诊断明确后几年内死亡，在急性期ATL患者可接受化学治疗，如环磷酰胺多柔比星、长春新碱和泼尼松，但常规治疗收效有限，对人体健康造成严重损害。患者的白血病细胞内有HTLV前病毒DNA的整合，所以HTLV前病毒DNA水平可以作为病毒载量之外的另一标志物。
- 即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。
- 特异性高，引物是根据人类嗜T淋巴细胞前病毒通用高度保守区设计，不会跟其它病毒的DNA发生交叉反应。
- 引物和探针经过优化，灵敏度高。
- 可以检测1型和2型的HTLV前病毒。
- 一管式荧光定量PCR检测，避免后续污染。
- 本试剂盒足够50次20μL反应体系的荧光定量PCR反应。7.本产品只能用于科研。
| 组分 | 规格 |
| 2×Probe qPCR MagicMix | 600μL |
| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1mL |
| HTLV前病毒通用PCR引物-探针混合液 | 150μL |
| HTLV前病毒通用PCR阳性对照(1×107拷贝/μL) | 50μL |
保存：-20℃，有效期一年。
一、稀释PCR阳性对照(以101～106拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)
如果做定性实验，则此步可以跳过。如果做定量实验，则需要稀释阳性对照做标准曲线。
由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。
- 标记6个离心管，分别为6，5，4，3，2，1。
- 用带芯枪头分别加入45μL荧光PCR专用模板稀释液(最好用带芯枪头，下同)。
- 在6号管中加入5μL 1×107拷贝/μL的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡1
分钟，得1×106拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。 - 换枪头，在5号管中加入5μL 1×106拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×105拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 换枪头，在4号管中加入5μL 1×105拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×104拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上用。
二、样品DNA的制备
- 如果有N个样品，必须设置N+2个提取，多出的一个是样品制备PC(样品制备阳性对照)，一个是样品制备NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL阳性对照的10000倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为样品制备PC。另外用水作为样品制备NC。
- 用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数DNA提取试剂盒兼容。
三、Probe qPCR反应(20μL体系，在样品制备室进行)
- 如果做定量分析并且只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照(用水做模板)，6个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做1次重复，则标记N+4个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照(用水做模板)，
1个用于PCR阳性对照(用第4号管中的阳性对照稀释液做模板)。下面只以定量分析为描述操作步骤， - 在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加):
成分 样品管
N+2个PCR阴性
对照管PCR阳性对照管
(1～6管)2×Probe qPCR
MagicMix10μL 10μL 各10μL HTLV前病毒探针法qPCR引物-探针混合液 3μL 3μL 各3μL N+2个待测DNA模板 7μL - - 超纯水 - 7μL - 第7步所得标准曲线样品稀释液(1～6号) - - 各7μL - 盖上盖子后上机，按下面参数进行PCR:
过程 温度 时间 预变性 94℃ 10min PCR反应
(40个循环)94℃ 15sec 55℃ 30sec(采集FAM通道的荧光信号) 72℃ 30sec
四、数据处理
- 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值，再推算出其浓度。
- 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照Ct必须大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于或等于30。对待测样品，如果其Ct大于或等于40则为阴性，如果小于或等于35
则为阳性。如果在35～40之间，则重复一次。若重复结果Ct值小于40，扩增曲线有明显起峰，该样本判断为阳性，否则为阴性。
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