产品货号：
BTN14-64120
中文名称：
单纯疱疹病毒2型(HSV)荧光定量PCR试剂盒(染料法)
英文名称：
Herpes Simplex Virus qPCR Kit(SYBR)
产品规格：
50次
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本产品是针对此需求而建立的一种检测HSV-II型的DNA总含量的、高灵敏的PCR检测方法。
根据HSV-II型保守区设计引物而开发的高灵敏荧光定量PCR产品。单纯疱疹病毒(Herpes Simple Viruses，HSV)属于疱疹病毒科a病毒亚科，为双股DNA病毒，疱疹病毒感染的宿主较为广泛，可感染人与其他脊椎动物，主要通过接触传染。目前，根据抗原的不同把HSV分为I型和II型。HSV-II型的原发感染主要引起生殖器疱疹，一旦感染，患者将终身携带这种病毒并周期性地出现生殖器疱疹性损伤，HSV-II感染还会增加HSV-II传播的风险。此外，II型病毒对田鼠细胞等有转化作用，同时怀疑疱疹病毒与女性的宫颈癌有关。因此对HSV-II型的快速诊断具有重要的意义。
保存：-20℃，有效期一年。
一、样品DNA的制备
二、引物的制备(在样品制备室进行)
三、稀释阳性对照(以102～107这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的长为75bp的DNA片段作为阳性对照。
三、设置PCR反应(20μL体系，在样品制备室进行)
四、数据处理
相关搜索：单纯疱疹病毒2型(HSV)荧光定量PCR试剂盒(染料法)，Herpes Simplex Virus qPCR Kit(SYBR)
根据HSV-II型保守区设计引物而开发的高灵敏荧光定量PCR产品。单纯疱疹病毒(Herpes Simple Viruses，HSV)属于疱疹病毒科a病毒亚科，为双股DNA病毒，疱疹病毒感染的宿主较为广泛，可感染人与其他脊椎动物，主要通过接触传染。目前，根据抗原的不同把HSV分为I型和II型。HSV-II型的原发感染主要引起生殖器疱疹，一旦感染，患者将终身携带这种病毒并周期性地出现生殖器疱疹性损伤，HSV-II感染还会增加HSV-II传播的风险。此外，II型病毒对田鼠细胞等有转化作用，同时怀疑疱疹病毒与女性的宫颈癌有关。因此对HSV-II型的快速诊断具有重要的意义。
- 根据HSV-II保守区设计的针对HSV-II的PCR引物，专一性强。
- 即开即用，用户只需要提供样品模板，操作简单，定量准确快速。
- 一管式荧光定量PCR检测，避免后续污染。
- 本试剂盒足够100次20μL反应体系的荧光定量PCR。
- 本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。
| 成分 | 规格 |
| 2×qPCR MagicMix | 1.0mL(棕色，装A袋) |
| 超纯水 | 1mL(红盖，装A袋) |
| 引物14-64120F | 1 OD(本色，装B袋) |
| 引物14-64120R | 1 OD(本色，装B袋) |
| HSV-II阳性对照(10E8copy/μL) | 50μL(白盖，装C袋) |
保存：-20℃，有效期一年。
一、样品DNA的制备
- 用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒DNA提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的一管式病毒DNA提取试剂盒或其升级版柱式病毒DNA提取试剂盒。本试剂盒免费赠送15次DNA病毒裂解液试用装(一管式病毒DNA提取试剂盒的成分)，其使用手册可以从本公司网站www.bjbalb.com，通过搜索产品名称一管式病毒DNA提取试剂盒或产品货号BTN3674下载。
二、引物的制备(在样品制备室进行)
- 按引物标签提示在装引物干粉的管中直接加入适量的超纯水(加入量见引物试管上的标签)，使得两条引物的浓度均为10μM(10pmol/μL)，然后各取50μL混合在一起，标注为引物混合物，放冰上待用。
三、稀释阳性对照(以102～107这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的长为75bp的DNA片段作为阳性对照。
- 标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。
- 用带芯枪头分别加入45μL超纯水(最好用带芯枪头，下同)。
- 先将本试剂盒提供的阳性对照用超纯水10倍梯度稀释到10E8拷贝/μL。放冰上待用。
- 在7号管中加入5μL 10E8拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得10E7拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
- 换枪头，在6号管中加入5μL 10E7拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得10E6拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
- 换枪头，从6号管中取5μL溶液到5号管中，充分震荡1分钟，得10E5拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
- 换枪头，从5号管中取5μL溶液到4号管中，得10E4拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
三、设置PCR反应(20μL体系，在样品制备室进行)
- 在PCR管中加入下列成分(待测样品需要做三次重复，下表只列出一次。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加)：
注：仅ABI7500、7700和7900仪器需要使用ROX作为对照，其他荧光PCR仪器(如iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene3000、RotorGene 6000和LightCycler480)不需要使用ROX。成分 样品 阴性对照 阳性对照(2～7管) 2×qPCR Mix 10μL 10μL 各10μL 引物混合物 2μL 2μL 各2μL 自备10×ROX(见注) 2μL 2μL 各2μL 待测样品DNA模板 1～5μL 不加 不加 阳性对照(2～7号) 不加 不加 各5μL 补水到 20μL 20μL 20μL - 盖上盖子后上机，按下面参数进行PCR(具体PCR参数可以根据仪器不同而自行优化)。
过程 温度 时间 预变性 95℃ 10分钟 PCR反应
(45个循环)95℃ 15秒 60℃ 1分钟 - 数据采集具体操作按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合DNA时，最大吸收光谱在471nm，结合DNA时的最大吸收光谱在500nm，最大发射光谱在530nm。
四、数据处理
- 以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品浓度的log和标准曲线计算出样品DNA的浓度。
相关搜索：单纯疱疹病毒2型(HSV)荧光定量PCR试剂盒(染料法)，Herpes Simplex Virus qPCR Kit(SYBR)