产品货号：
BTN14-58300
中文名称：
猴病毒40 (SV40)荧光定量PCR试剂盒(染料法)
英文名称：
Simian Virus 40 qPCR Kit(SYBR)
产品规格：
50次
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本产品是专门用于检测SV40的高灵敏荧光定量PCR检测方法。
SV40是猴病毒40(Simian virus 40)的缩写，其基因组是一种环形双链的DNA，基因组5.2kb。SV40在体外可使人及动物多种组织类型的正常细胞发生恶性转化，在转基因小鼠体内可诱发多种肿瘤形成，并且人类许多肿瘤的发生也与之有关。SV40和BK病毒(BKV，BK Virus)、JK病毒(JKV，JK Virus)等病毒的生物学特性各不相同，但由于新生的小鼠、大鼠、仓鼠、家兔、豚鼠等对这些病毒都特别敏感，多个部位或器官会发生肉瘤或癌症，故又通称多瘤病毒(Polyoma Virus)。
1.根据SV40的T-ag基因设计的针对SV40的PCR引物，专一性强，对同属多瘤病毒的BKV和JKV无交叉反应。
2.灵敏度比常规PCR高2～3个数量级，可以达到几百拷贝/反应。
3.即开即用，用户只需要提供样品模板，操作简单，定量准确快速。
4.一管式荧光定量PCR检测，避免后续污染。
5.本试剂盒足够100次20μL反应体系的荧光定量PCR。
6.本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。
保存：-20℃，有效期一年。
一、样品DNA的制备
二、引物的制备(在样品制备室进行)
三、稀释阳性对照(以102～107这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的160bp的SV40 T-ag DNA片段作为阳性对照。
三、设置qPCR反应(20μL体系，在样品制备室进行)
四、数据处理
相关搜索：猴病毒40 (SV40)荧光定量PCR试剂盒(染料法)，Simian Virus 40 qPCR Kit(SYBR)
SV40是猴病毒40(Simian virus 40)的缩写，其基因组是一种环形双链的DNA，基因组5.2kb。SV40在体外可使人及动物多种组织类型的正常细胞发生恶性转化，在转基因小鼠体内可诱发多种肿瘤形成，并且人类许多肿瘤的发生也与之有关。SV40和BK病毒(BKV，BK Virus)、JK病毒(JKV，JK Virus)等病毒的生物学特性各不相同，但由于新生的小鼠、大鼠、仓鼠、家兔、豚鼠等对这些病毒都特别敏感，多个部位或器官会发生肉瘤或癌症，故又通称多瘤病毒(Polyoma Virus)。
1.根据SV40的T-ag基因设计的针对SV40的PCR引物，专一性强，对同属多瘤病毒的BKV和JKV无交叉反应。
2.灵敏度比常规PCR高2～3个数量级，可以达到几百拷贝/反应。
3.即开即用，用户只需要提供样品模板，操作简单，定量准确快速。
4.一管式荧光定量PCR检测，避免后续污染。
5.本试剂盒足够100次20μL反应体系的荧光定量PCR。
6.本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。
| 组分 | 规格 |
| 2×qPCR MagicMix | 1.0mL(装A袋) |
| 超纯水 | 1mL |
| (装A袋)引物14-58300F | 1 OD(装B袋) |
| 引物14-58300R | 1 OD(装B袋) |
| SV40 T-ag基因阳性对照(1×108copy/μL) | 50μL(装C袋) |
保存：-20℃，有效期一年。
一、样品DNA的制备
- 用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒DNA提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的柱式病毒DNA提取试剂盒。
二、引物的制备(在样品制备室进行)
- 按引物标签提示在装引物干粉的管中直接加入适量的超纯水(加入量见引物试管上的标签)，使得两条引物的浓度均为10μM(10pmol/μL)，然后各取110μL混合在一起得220μL，标注为引物混合物，放冰上待用。220μL引物混合物足够100次qPCR反应。
三、稀释阳性对照(以102～107这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的160bp的SV40 T-ag DNA片段作为阳性对照。
- 标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。
- 用带芯枪头分别加入45μL超纯水(最好用带芯枪头，下同)。
- 在7号管中加入5μL本试剂盒提供的1×108拷贝/μL的阳性对照，充分震荡1分钟，得1×107拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
- 换枪头，在6号管中加入5μL 1×107拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×106拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
- 换枪头，从6号管中取5μL 1×106拷贝/μL的阳性对照到5号管中，充分震荡1分钟，得1×105拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
- 换枪头，从5号管中取5μL 1×105拷贝/μL的阳性对照到4号管中，得1×104拷贝/μL的阳性对照，放冰上待用。
- 重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
三、设置qPCR反应(20μL体系，在样品制备室进行)
- 在PCR管中加入下列成分(待测样品需要做三次重复，下表只列出一次。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加)：
注：仅ABI7500、7700和7900仪器需要使用ROX作为对照，其他荧光PCR仪器(如iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene3000、RotorGene 6000和LightCycler480)不需要使用ROX。成分 样品 阴性对照 阳性对照(2～7管) 2×qPCR MagicMix 10μL 10μL 各10μL 引物混合物 2μL 2μL 各2μL 自备10×ROX(见注) 2μL 2μL 各2μL 待测样品DNA模板 1～5μL 不加 不加 阳性对照(2～7号) 不加 不加 各5μL 补水到 20μL 20μL 20μL - 盖上盖子后上机，按下面参数进行PCR(具体PCR参数可以根据仪器不同而自行优化)。
过程 温度 时间 预变性 95℃ 5分钟 PCR反应
(40个循环)95℃ 15秒 60℃ 60秒 - 数据采集具体操作按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合DNA时，最大吸收光谱在471nm，结合DNA时的最大吸收光谱在500nm，最大发射光谱在530nm。
四、数据处理
- 以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值，再推算出其浓度。
相关搜索：猴病毒40 (SV40)荧光定量PCR试剂盒(染料法)，Simian Virus 40 qPCR Kit(SYBR)