产品货号：
BTN14-54000
中文名称：
小鼠白血病病毒(MLV)荧光定量RT-PCR试剂盒(染料法)
英文名称：
Mouse Leukemia Virus RT-qPCR Kit(SYBR)
产品规格：
50次
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
本产品基于PCR原理开发。
小鼠白血病病毒(murine leukemia virus，MLV)具有致小鼠白血病活性的RNA肿瘤病毒。是最常用的载体。由于逆转录病毒载体只转导分裂细胞，而大部分RA滑膜内细胞分裂并不活跃，所以主要采用体外基因治疗。本产品对该病毒的检测有着重要作用。
1.一站式，用于不需要单独准备每种成分，包括引物和对照。
2.根据小鼠白血病病毒的保守基因序列设计的引物，具有良好的特异性。
3.基于染料法qRT-PCR检测，灵敏度比常规RT-PCR高10～100倍，可以达到至少1000拷贝/反应。
4.使用一管式qRT-PCR技术，RT和PCR两步在一个试管内完成，不需要中间转移样品，降低了操作误差和可能的污染。
5.本产品足够50次30μL体系的RT-PCR，只能用于科研，不能用于临床。
保存：-20℃，有效期一年。
一、稀释阳性对照(以102～107这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行)。
1.标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。用带芯枪头分别加入45μL荧光PCR专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同)。
2.在7号管中加入5μL 1×108拷贝/μL的阳性对照(本试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1×107拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
3.换枪头，在6号管中加入5μL 1×107拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×106拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
4.换枪头，在5号管中加入5μL 1×106拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×105拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
二、样品RNA的制备
5.如果有N个样品，必须设置N+2个提取，多出的一个是PC(样品制备阳性对照)，一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL上步制备的阳性对照梯度稀释液中的第4号(浓度为1×104拷贝/μL，10μL相当于1万拷贝)再加上一定量的水作为制备的阳性对照(加水后其总体积跟样品一样，样品体积多少取决于所用试剂盒的要求)。可以用水作为制备的阴性对照。
6.用自选方法纯化N+2个样品的RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒RNA提取试剂盒兼容。本试剂盒免费赠送20次免RNA提取的核酸释放剂试用装，其使用手册可以从本公司网站www.bjbalb.com，通过搜索产品名称核酸释放剂或产品货号BTN61202下载。
三、设置RT-PCR反应(20μL体系，在样品制备室进行)
7.如果做定量分析并且只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照，6个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做1次重复，则标记N+4个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照(用水做模板)，1个用于PCR阳性对照(用第4号阳性对照稀释液做模板)。下面只描述定量分析的步骤，定性分析只是把6个标曲反应缩减成1个，其余不变。
8.在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，阳性对照样品要等所有管子盖上盖子后最后加)：
注：
需使用ROX染料I的机型：ABI Prism7000、7300、7700、7900HT、Step-One、Step-One Plus。
需使用ROX染料II的机型：ABI Prism 7500、7500Fast、MJ Research的Chromo4、Opticon(II)Corbett Rotor Gene 3000。
不需要使用ROX的机型：Thermal Cycle Dice Real Time System，LightCycler、Smart Cycler System、Agilent Mx3000P、RotorGene3000、RotorGene 6000。
9.上机后按下面参数进行RT-PCR(参数可能会因仪器不同而需优化)。
四、数据处理
10.如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品RNA浓度的log值，再推算出其浓度。
11.如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照Ct必须大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于或等于30。对待测样品，如果其Ct大于或等于40则为阴性，如果小于或等于35则为阳性。
相关搜索：小鼠白血病病毒(MLV)荧光定量RT-PCR试剂盒(染料法)，Mouse Leukemia Virus RT-qPCR Kit(SYBR)
小鼠白血病病毒(murine leukemia virus，MLV)具有致小鼠白血病活性的RNA肿瘤病毒。是最常用的载体。由于逆转录病毒载体只转导分裂细胞，而大部分RA滑膜内细胞分裂并不活跃，所以主要采用体外基因治疗。本产品对该病毒的检测有着重要作用。
1.一站式，用于不需要单独准备每种成分，包括引物和对照。
2.根据小鼠白血病病毒的保守基因序列设计的引物，具有良好的特异性。
3.基于染料法qRT-PCR检测，灵敏度比常规RT-PCR高10～100倍，可以达到至少1000拷贝/反应。
4.使用一管式qRT-PCR技术，RT和PCR两步在一个试管内完成，不需要中间转移样品，降低了操作误差和可能的污染。
5.本产品足够50次30μL体系的RT-PCR，只能用于科研，不能用于临床。
| 组分 | 规格 |
| 2×qRT-PCR缓冲液 | 500μL |
| 10×qRT-PCR酶混合液 | 100μL |
| ROX染料I，50× | 20μL |
| ROX染料II，50× | 20μL |
| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1mL |
| 小鼠白血病病毒染料法qRT-PCR引物混合液 | 100μL |
| 小鼠白血病病毒染料法qRT-PCR阳性对照(1×108拷贝/μL) | 50μL |
保存：-20℃，有效期一年。
一、稀释阳性对照(以102～107这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行)。
1.标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。用带芯枪头分别加入45μL荧光PCR专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同)。
2.在7号管中加入5μL 1×108拷贝/μL的阳性对照(本试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1×107拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
3.换枪头，在6号管中加入5μL 1×107拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×106拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
4.换枪头，在5号管中加入5μL 1×106拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×105拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
二、样品RNA的制备
5.如果有N个样品，必须设置N+2个提取，多出的一个是PC(样品制备阳性对照)，一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL上步制备的阳性对照梯度稀释液中的第4号(浓度为1×104拷贝/μL，10μL相当于1万拷贝)再加上一定量的水作为制备的阳性对照(加水后其总体积跟样品一样，样品体积多少取决于所用试剂盒的要求)。可以用水作为制备的阴性对照。
6.用自选方法纯化N+2个样品的RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒RNA提取试剂盒兼容。本试剂盒免费赠送20次免RNA提取的核酸释放剂试用装，其使用手册可以从本公司网站www.bjbalb.com，通过搜索产品名称核酸释放剂或产品货号BTN61202下载。
三、设置RT-PCR反应(20μL体系，在样品制备室进行)
7.如果做定量分析并且只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照，6个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做1次重复，则标记N+4个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照(用水做模板)，1个用于PCR阳性对照(用第4号阳性对照稀释液做模板)。下面只描述定量分析的步骤，定性分析只是把6个标曲反应缩减成1个，其余不变。
8.在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，阳性对照样品要等所有管子盖上盖子后最后加)：
| 成分 | 样品管 N+2个 | RT-PCR 阴性对照 | RT-PCR阳性对照 (2～7管) |
| 2×qRT-PCR缓冲液 | 10μL | 10μL | 各10μL |
| 小鼠白血病病毒染料法qRT-PCR引物混合液 | 2μL | 2μL | 各2μL |
| 50×ROX(见注) | 0.4μL | 0.4μL | 各0.4μL |
| 样品制备所得RNA模板(来自于第8步) | 5.6μL | 不加 | 不加 |
| 稀释所得6个阳性对照(来自于第6步) | 不加 | 不加 | 各5.6μL |
| 10×qRT-PCR酶混合液 | 2μL | 2μL | 2μL |
需使用ROX染料I的机型：ABI Prism7000、7300、7700、7900HT、Step-One、Step-One Plus。
需使用ROX染料II的机型：ABI Prism 7500、7500Fast、MJ Research的Chromo4、Opticon(II)Corbett Rotor Gene 3000。
不需要使用ROX的机型：Thermal Cycle Dice Real Time System，LightCycler、Smart Cycler System、Agilent Mx3000P、RotorGene3000、RotorGene 6000。
9.上机后按下面参数进行RT-PCR(参数可能会因仪器不同而需优化)。
| 过程 | 温度 | 时间 |
| RT(逆转录) | 50℃ | 15～30分钟 |
| 预变性 | 95℃ | 5分钟 |
| qRT-PCR反应 (40个循环) | 95℃ | 15秒 |
| 60℃ | 1分钟(采集FAM通道的荧光信号) | |
| 按仪器预设程序进行溶解曲线分析 | ||
四、数据处理
10.如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品RNA浓度的log值，再推算出其浓度。
11.如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照Ct必须大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于或等于30。对待测样品，如果其Ct大于或等于40则为阴性，如果小于或等于35则为阳性。
相关搜索：小鼠白血病病毒(MLV)荧光定量RT-PCR试剂盒(染料法)，Mouse Leukemia Virus RT-qPCR Kit(SYBR)