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猪圆环病毒3型(PCV-3)荧光定量PCR试剂盒(染料法)图片
产品货号:
BTN14-42530
中文名称:
猪圆环病毒3型(PCV-3)荧光定量PCR试剂盒(染料法)
英文名称:
Porcine Circovirus 3 qPCR Kit(SYBR)
产品规格:
50次
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
本产品是以染料法荧光定量PCR技术为基础开发的专门检测猪圆环病毒3型的试剂盒。


猪圆环病毒(porcine circovirus,PCV)在分类学上属圆环病毒科圆环病毒属,为已知的最小的动物病毒之一。病毒粒子直径14~17nm,呈20面体对称结构,无囊膜,含有共价闭合的单股环状负链DNA,基因组大小约为1.76kb。PCV对外界理化因子的抵抗力相当强。PCV3于2016年首次在美国报道,与母猪丘疹性皮炎、肾病综合征和流产相关。因此快速检测猪圆环病毒3型具有重要意义。


  1. 即开即用,用户只需要提供DNA模板。
  2. 特异性高,引物是根据猪圆环病毒3型高度保守区设计,不会扩增其他病毒。
  3. 引物和扩增体系经过优化,灵敏性比常规PCR高100倍。
  4. 提供无传染性的PCR阳性对照,便于区分假阴性样品。
  5. 一管式操作,荧光PCR检测,不容易产生环境污染。
  6. 本产品只能用于科研,本试剂盒足够50次20μL体系的PCR。



组分规格
2×qPCR MagicMix500μL
荧光PCR专用模板稀释液1mL
猪圆环病毒3型染料法qPCR引物混合液100μL
猪圆环病毒3型染料法qPCR阳性对照(1×108拷贝/μL)50μL

保存:-20℃,有效期一年。


一、制备标准曲线样品(以102~107拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)。
由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。
  1. 标记6个离心管,分别为7,6,5,4,3,2。
  2. 用带芯枪头分别加入45μL荧光PCR专用模板稀释液,最好用带芯枪头,下同)。
  3. 在7号管中加入5μL阳性对照(其浓度为1×108拷贝/μL,试剂盒提供),充分震荡1分钟,得1×107拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
  4. 换枪头,在6号管中加入5μL 1×107拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×106拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
  5. 换枪头,在5号管中加入5μL 1×106拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×105拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
  6. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。


二、样品DNA的制备
  1. 用自选方法纯化样品的DNA,本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。
  2. 如果有N个样品,则需要进行N+2个样品提取,多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。本试剂盒免费赠送20次免DNA提取的核酸释放剂试用装,该释放剂的裂解液可以直接作为PCR模板,省略了DNA提取步骤。其使用手册可从www.bjbalb.com通过搜索产品名称核酸释放剂或产品货号BTN61202下载。


三、设置qPCR反应(20μL体系,在样品制备室进行)
  1. 如果进行定量分析,则标记N+9个PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于PCR阴性对照,6个用于标准曲线样品。如果做定性分析,则6个标准曲线样品只选一个做(可以选4号,其余样品不变)。
    以下只介绍定量分析的反应设置。
  2. 在标记管中按下表加入各成分:
    成分样品管
    N+2个
    PCR阴性
    对照管
    曲线样品管
    (2~7管)
    2×qPCR MagicMix10μL10μL各10μL
    猪圆环病毒3型染料法qPCR引物混合液2μL2μL各2μL
    自备10×ROX(见注)2μL2μL各2μL
    N+2个待测样品DNA模板6μL不加不加
    自备超纯水不加6μL不加
    第7步所得标准曲线样品稀释液(2~7号)不加不加各6μL
    注:仅ABI7500、7700和7900仪器需要使用ROX作为对照,其他荧光PCR仪器(如iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene3000、RotorGene 6000和LightCycler480)不需要使用ROX,则用水替代。
  3. 盖上盖子后上机,按下面参数进行PCR(具体PCR参数可以根据仪器不同而自行优化)。
    过程温度时间
    预热50℃2min
    预变性95℃10min
    PCR反应
    (40个循环)
    95℃15sec
    60℃1min(采集SYBR通道的荧光信号)
    按仪器预设程序进行熔解曲线分析


四、数据处理
  1. 设定60℃~96℃范围的熔解曲线分析,排除假阳性。
  2. 如果把本试剂盒用于定量检测,则以阳性对照浓度的log值为横轴,以Ct值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值,再推算出其浓度。
  3. 如果把本试剂盒用于定性检测,只判断阳性或阴性,则阴性对照Ct必须大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长,有典型扩增曲线,Ct值应该小于或等于30。对待测样品,如果其Ct大于或等于40则为阴性,如果小于或等于35则为阳性。如果在35~40之间,则重复一次。重复实验的Ct值如果大于或等于40则为阴性,如果小于40,则为阳性。




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