产品货号：
BTN13-29000
中文名称：
猪生殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)RT-PCR试剂盒
英文名称：
Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus RT-PCR Kit
产品规格：
50次
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
本产品根据PCR原理开发，可用于科研领域快速检测猪生殖与呼吸综合症病毒。
猪生殖与呼吸综合症是由病毒（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus，PRRSV）引起猪的一种高度接触性传染病。其主要特征为母猪发热，厌食，妊娠晚期流产，死产，产木乃伊胎，仔猪有呼吸道症状和高的死亡率，严重危害养猪业的发展。因此，该病的快速准确鉴定，对该病的预防和检疫有着重要作用。
注：为避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供专一的DNA片段作为阳性对照。
保存：-20℃，有效期一年。
一、样品RNA的制备
二、设置RT-PCR反应（20μL体系）
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猪生殖与呼吸综合症是由病毒（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus，PRRSV）引起猪的一种高度接触性传染病。其主要特征为母猪发热，厌食，妊娠晚期流产，死产，产木乃伊胎，仔猪有呼吸道症状和高的死亡率，严重危害养猪业的发展。因此，该病的快速准确鉴定，对该病的预防和检疫有着重要作用。
- 一站式，用于不需要单独准备每种成分，包括引物和对照。
- 根据猪生殖与呼吸综合症病毒的保守基因序列设计的引物，具有良好的特异性。
- 灵敏度可以达到1000拷贝/反应。
- 使用一管式RT-PCR技术，RT和PCR两步在一个试管内完成，不需要中间转移样品，降低了操作误差和可能的污染。
- 本产品足够50次20μL体系的RT-PCR。
- 本产品只能用于科研，不能用于临床。
| 组分 | 规格 |
| 5×双酶一管式RT-PCR Buffer | 200μL |
| MMLV-Taq Mix | 75μL |
| 超纯水 | 1mL |
| 猪生殖与呼吸综合症病毒通用RT-PCR引物混合液 | 100μL |
| 猪生殖与呼吸综合症病毒通用RT-PCR阳性对照 (1×108拷贝/μL) | 50μL |
| 核酸释放剂（试用装） | 20次(1mL) |
注：为避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供专一的DNA片段作为阳性对照。
保存：-20℃，有效期一年。
一、样品RNA的制备
- 如果有N个样品，必须设置N+2个提取，多出的一个是PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用猪生殖与呼吸综合症病毒PCR阳性对照的1000倍稀释液作为制备的阳性对照。可以用水作为制备的阴性对照。制备所得成为样品RNA。
- 用自选方法纯化N+2个样品的RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒RNA提取试剂盒兼容。本试剂盒免费赠送20次核酸释放剂试用装。
二、设置RT-PCR反应（20μL体系）
- 如果有N+2个样品，则标记N+4个PCR管（额外增加的两个管一个是RT-PCR阳性对照，另一个是RT-PCR阴性对照）并按照下表在PCR管中加入下列成分：
成份 N+2个
样品管RT-PCR
阴性对照RT-PCR
阳性对照5×双酶一管式RT-PCR Buffer 各4μL 4μL 4μL 猪生殖与呼吸综合症病毒
通用RT-PCR引物混合液各2μL 2μL 2μL N+2个制备的RNA样品 各12.5μL - - 超纯水 - 12.5μL - 猪生殖与呼吸综合症病毒
通用RT-PCR阳性对照的1000倍稀释液- - 12.5μL MMLV-Taq Mix 1.5μL 1.5μL 1.5μL - 上机进行RT-PCR，RT-PCR反应参数为：
过程 温度 时间 逆转录 42℃ 30min 预变性 95℃ 5min PCR反应
（35个循环）95℃ 30sec 53℃ 30sec 72℃ 30sec 延伸 72℃ 7min - 琼脂糖电泳检测扩增效果。如果阴性对照有扩增产物或阳性对照无扩增产物，则说明实验失败，需要分析实验失败的原因。只有在阴性对照没有扩增产物、阳性对照有扩增产物的情况下，才有必要分析样品的实验结果。预期的PCR产物长度为195bp。如果有扩增产物则为阳性，如果无则为阴性。
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