产品货号:
YTC3004
中文名称:
BamHI限制性内切酶
英文名称:
BamHI Endonuclease
产品规格:
2000U
发货周期:
1~3天
产品价格:
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识别序列 | 酶切温度 | 失活条件 | 甲基化干扰 |
G^GATCC CCTAG^G | 37℃ | 80℃加热20min,部分失活 | 无 |
在37℃,50μL反应体系中反应1小时,将1μg的λDNA完全分解的酶量定义为1个活性单位,即1U。
组分 | 规格 |
BamHI(10U/μL) | 200μL |
10×BamHI Buffer | 300μL |
10×Buffer Y | 1mL |
保存:-20℃
10mM Tris-HCl(pH7.4@25℃),200mM NaCl,1mM DTT,0.1mM EDTA,0.15% Triton X-100,0.2mg/mL BSA,50% glycerol。
- 1×BamHI Buffer:
10mM Tris-HCl(pH8.0@37℃),5mM MgCl2,100mM KCl,1mM 2-mercaptoethanol,0.02% Triton X-100,0.1mg/mL BSA。 - 1×Buffer Y:
33mM Tris-acetate(pH7.9@37℃),10mM醋酸镁,66mM醋酸钾,0.1mg/mL BSA。- 在此缓冲液中,当酶量5倍或以上过量时会产生星号活性,即产生非特异性酶活性。
- 内切酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上,使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。
- 如果发现预期的酶切位点不能切开,请确认是否存在甲基化干扰问题。
- 甘油含量大于5%,低盐浓度,pH>8.0或酶大大过量(约20倍以上)可能会导致星号活性,即产生非特异性酶切。
- 单酶切反应:
- 参考如下反应体系进行:
成分 用量 待酶切DNA 不超过1μg ddH2O或Milli-Q水 适量 10X Buffer BamHI 2μL BamHI 0.5~1μL 总体积 20μL - 请注意把Buffer和水等充分混匀后再加入内切酶,加入内切酶后可以用枪吹打或轻轻Vortex混匀。
- 37℃孵育1小时或更长时间。
- 通常参考上述条件孵育1小时已经足够,但多孵育数小时甚至孵育过夜也不会产生负面影响。如果酶切较长时间甚至酶切过夜,可以使用更少量的酶。
- 待酶切DNA量较大时,可以适当延长酶切时间或按比例放大酶切体系。
- 通常参考上述条件孵育1小时已经足够,但多孵育数小时甚至孵育过夜也不会产生负面影响。如果酶切较长时间甚至酶切过夜,可以使用更少量的酶。
- 参考如下反应体系进行:
- 双酶切或多酶切:需选择适当的可以兼容两个或多个内切酶的缓冲液,然后参考上表设置反应体系。如果没有合适的缓冲液可以选择,可以在一种酶消化完毕后进行纯化,纯化完毕后再进行另外一种酶切反应。
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