产品货号:
YTC2043
中文名称:
XbaI限制性内切酶
英文名称:
XbaI Endonuclease
产品规格:
1500U
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
5'…T▼C T A G A…3'
3'…A G A T C▲T…5'
在37℃,50μL反应体系中反应1小时,将1μg的λDNA完全分解的酶量定义为1个活性单位,即1U。
组分 | 规格 |
XbaI(10U/μL) | 150μL |
10×Buffer Y | 1mL |
保存:-20℃
10mM Tris-HCl(pH7.5@25℃),100mM KCl,0.1mM EDTA,10mM 2-ME,0.2mg/mL BSA,50% glycerol。
1×Buffer Y:33mM Tris乙酸(pH7.9@37℃),10mM MgAc2,66mM KAc,0.1mg/mL BSA。
1×Buffer Y,37℃温育。
酶切和连接效率:50倍过量的本内切酶消化1小时,>95%被酶切的片段可以被连接并被重新酶切(recut)。
65℃加热20分钟。
- 根据识别序列邻近序列的不同,酶切效果受dam methylase导致的DNA甲基化的影响。
- 内切酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上,使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。
- 如果发现预期的酶切位点不能切开,请确认是否存在甲基化干扰问题。
- 单酶切时可以参考如下反应体系进行:
- 按下表加入各成分配制酶切反应:
成分 用量 待酶切DNA 不超过1μg 双蒸水或Milli-Q水 适量 10×Buffer Y 2μL XbaI(10U/μL) 0.5~1μL 总体积 20μL - 请注意把Buffer和水等充分混匀后再加入内切酶,加入内切酶后可以用枪吹打或轻轻Vortex混匀。
- 待酶切DNA量较大时,可以适当延长酶切时间或按比例放大酶切体系。
- 请注意把Buffer和水等充分混匀后再加入内切酶,加入内切酶后可以用枪吹打或轻轻Vortex混匀。
- 37℃孵育1小时或更长时间。
- 通常参考上述条件孵育1小时已经足够,但多孵育数小时甚至孵育过夜也不会产生负面影响。如果酶切较长时间甚至酶切过夜,可以使用更少量的酶。
- 按下表加入各成分配制酶切反应:
- 双酶切或多酶切时,需选择适当的可以兼容两个或多个内切酶的缓冲液,然后参考上表设置反应体系。如果没有合适的缓冲液可以选择,可以在一种酶消化完毕后进行纯化,纯化完毕后再进行另外一种酶切反应。
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