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XbaI限制性内切酶图片
产品货号:
YTC1043
中文名称:
XbaI限制性内切酶
英文名称:
ByFast XbaI Endonuclease
产品规格:
500μL
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价

ByFast系列快速内切酶是一系列经过基因工程重组、能够在5~15分钟内仅使用一种缓冲液就能快速完成DNA酶切的高品质限制性内切酶。ByFast系列快速内切酶适用于质粒DNA、PCR产物或基因组DNA等的快速酶切。




  • 在5~15分钟内就能完成酶切。
  • 所有ByFast系列内切酶共用一种酶切缓冲液CutSharp Buffer,大大简化酶切反应体系,方便进行双酶切或多酶切。
  • 针对不同酶在CutSharp Buffer中活性存在差异的问题,调整了不同酶的浓度,可以统一按照每20μL体系加入1μL酶量的用量进行酶切反应。
  • 碱性磷酸酶、南极磷酸酶、T4 DNA Ligase、T4多聚核苷酸激酶、T4 PNK (3'phosphatase minus)等很多修饰酶等都100%兼容CutSharp Buffer,使“酶切-连接”和“酶切-修饰-连接”等反应体系可以兼容,支持一管化反应。
  • 良好的酶活冗余度,轻松应对底物过量或困难模板酶切。



识别序列同裂酶酶切温度失活条件甲基化干扰?
5'-T^CTAGA-3'
3'-AGATC^T-5'
37℃80℃加热20min有时有干扰



  • 酶活性检测:最适反应温度下,在20μL反应体系中,1μL XbaI能够在15min内完全消化1μg λDNA (Dam-/HindIII digest)。
  • 长时间酶切检测:最适反应温度下,将1μL XbaI与1μg Λdna (Dam-/HindIII digest)共同温育3h,未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解,延时酶切可能出现星号活性。
  • 酶切-连接-再酶切检测:最适反应温度下,使用1μL XbaI消化底物,回收酶切产物,在22℃下使用适量T4 DNA Ligase可以将酶切产物重新连接,将连接产物再次回收后,使用相同的内切酶可以重新切开连接产物。
  • 非特异性内切酶活性检测:最适反应温度下,将1μL XbaI与1μg超螺旋质粒DNA共同温育4h,使用琼脂糖凝胶电泳检测,质粒DNA仍然处于超螺旋状态。
  • 蓝白斑检测:将含有单一lacZα基因的载体以1μL XbaI消化,重新连接后转化入大肠杆菌感受态细胞,涂布在含有对应抗生素、IPTG和X-gal的LB培养基平板上。连接正确的产物会生长出蓝色菌落,而连接错误(即DNA末端切口不完整)的产物将得到白色菌落。对于ByFast系列限制酶而言,白色菌落比例应小于1%。



组分规格
ByFast XbaI500μL
10×CutSharp Buffer1mL
10×LoadEasy CutSharp Buffer1mL

保存:-20℃,有效期2年。


  • 内切酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上,使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。
  • 不含核酸酶的超纯水推荐选购百奥莱博的无菌无酶超纯水(货号:YT998)。
  • 如果发现预期的酶切位点不能切开,请确认是否存在甲基化干扰问题。
  • 同裂酶对于不同的甲基化修饰可能具有不同敏感性,遇到可能存在甲基化干扰问题时,可以尝试同裂酶。
  • ByFast XbaI快速内切酶在不同反应缓冲液中的活性(缓冲液兼容性)如下:
    CutSharpLoadEasy CutSharpThermo FastDigestNEB CutSmartTakara QuickCut
    100%100%50%100%100%
  • ByFast XbaI快速内切酶识别位点的甲基化影响请参考下表:
    DamDcmCpGEcoKIEcoBI
    序列可能重叠剪切阻断无影响无影响无影响无影响



  • 单酶切时可以参考如下反应体系,在冰浴上进行操作。
    成分质粒DNAPCR产物基因组DNA
    超纯水(17-x)μL(26-x)μL(40-x)μL
    10×CutSharp Buffer2μL3μL5μL
    底物DNAxμL(≤1μg)xμL(~0.2μg)xμL(5μg)
    XbaI内切酶1μL1μL5μL
    总体积20μL30μL50μL
    37℃温育15min15~30min30~60min

    注:上述反应体系适用于经过纯化的PCR产物酶切。未纯化的PCR产物有一定的离子强度和pH,10×CutSharp Buffer加入量可适当减少至2μL。但由于很多DNA聚合酶同时具有外切酶活性,会影响酶切产物,因此如下一步需进行连接、克隆等操作,建议酶切前对PCR产物进行纯化。
    • 参考上表依次加入各种液体后,用移液器轻柔吸打或轻弹管壁以混匀(切勿涡旋混合),然后瞬时离心以沉降液体至管底。
    • 37℃温育15min (质粒),或15~30min (PCR产物),或30~60min (基因组DNA)。酶切反应时优先推荐使用水浴,反应温度通常更加恒定一些。
    • 80℃温育20min即可使酶失活并停止反应(可选)。
  • 双或多酶切时可以在参考上表单酶切反应体系设置的基础上,参考如下原则设置反应体系。
    • 每种快速内切酶的用量为1μL,并根据需要适当扩大反应体系;
    • 所有快速内切酶的体积总和不得超过总反应体系的1/10;
    • 如果所用的几种快速内切酶的最适反应温度不同,应先从最适温度低的酶开始酶切,再添加最适温度较高的酶,在其最适反应温度下进行酶切反应。

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