产品目录

本制品是一种锰离子(Mn²⁺)依赖的重组表达纯化的磷酸蛋白酶，可以对磷酸化的丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸和组氨酸残基进行脱磷酸反应。本制品是大肠杆菌重组表达的带6×His标签的重组λ磷酸酶。该磷酸酶由λ噬菌体开放阅读框ORF221所编码，编码产物共包含221个氨基酸残基。

λ蛋白磷酸酶可以用于蛋白的去磷酸化，从而可以用于研究蛋白磷酸化与其活性和结构的关系，以及验证蛋白磷酸化位点抗体的特异性等。


在30℃ pH7.5条件下反应1分钟，能够水解1nmol p-nitrophenyl phosphate所需的酶量定义为一个活性单位。


百奥莱博的λ蛋白磷酸酶酶活性鉴定结果参考图1。

图1.λ蛋白磷酸酶酶活测定实验图。左图：pNP标准曲线。右图：λ蛋白磷酸酶按照30、40、50、80、100、200、500倍稀释后，在50μL反应体系中的酶量分别为0.27μg、0.20μg、0.16μg、0.10μg、0.08μg、0.04μg、0.016μg，并与100mM pNPP在1×Reaction Buffer和1×MnCl2中在30℃反应5min后，加入12.5μL 3M NaOH终止反应，测定产生的pNP在405nm吸光度，并根据pNP标准曲线，计算λ蛋白磷酸酶酶活性。不同批次检测出来的酶活性会略有差别。


酶分子量：约26kDa
纯度：纯度大于95%

组分	20kU	100kU
λ蛋白磷酸酶(70U/μL)	300μL	1.5mL
10×Reaction Buffer	1mL	5mL
10×MnCl2	1mL	5mL

保存：-20℃，有效期1年。


50mM This-HCl(pH7.5)，100mM NaCl，0.1mM MnCl2，0.1mM EGTA，2mM DTT，0.01%Brij35，50%(v/v)甘油。


10×Reaction Buffer：
500mM Hepes(pH7.5)，100mM NaCl，20mM DTT，0.1% Brij35。

• 在50mM EDTA存在的条件下，65℃加热1小时可使λ蛋白磷酸酶失活。
  
• 10mM钒离子能抑制λ蛋白磷酸酶活性约90%，50mM EDTA可以抑制λ蛋白磷酸酶活性约95%。
  
• 1% Triton X-100、0.4% Nonidet P-40、0.025% Tween 20、0.5M NaCl、0.1mM ATP、10μg/mL pepstatin A、10μg/mL leupeptin、10μg/mL aprotinin、0.5mM PMSF、1mM benzamidine不影响λ蛋白磷酸酶的酶活性。

反复冻融会导致λ蛋白磷酸酶酶活性降低。如果希望在-80℃冻存，建议适当分装后保存，以方便后续使用。在-20℃存放时不会结冻，但在-80℃冻存时会结冻。
需要注意的是不同蛋白脱磷酸化反应的速率是不同的，该酶的最佳反应温度是30℃。某些样品的粗提液用该酶进行去磷酸化处理时，请注意用尽可能短的时间进行处理，同时添加适量蛋白酶抑制剂以减少目的蛋白的降解。

• λ蛋白磷酸酶对不同蛋白的脱磷酸化反应有不同活性，所以在实际应用中，我们建议对酶浓度和反应时间进行优化。反应体系中，反应缓冲液为1×Reaction Buffer并且同时加入1×MnCl2 (最终浓度为1mM)。
  
• 以一般的去磷酸化反应为例：在50μL反应体系中，100U的λ蛋白磷酸酶在30分钟内可以除去相当于5μM的磷酸化的蛋白(单磷酸化)中约100%的磷酸。

相关搜索：重组λ蛋白磷酸酶，蛋白磷酸酶，重组蛋白，Lambda Protein Phosphatase