产品货号：
YTB4501
中文名称：
T7核酸内切酶I
英文名称：
T7 Endonuclease I
产品规格：
250U|1250U|5000U
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
本产品是一种比较特殊的DNA内切酶，能识别并切割不完全配对的DNA、十字型结构DNA、Holliday结构或交叉DNA和异源双链DNA。T7EI切割的位点位于错配碱基5’端的第一、第二或第三个磷酸二脂键。此外，T7EI也能以很慢的速度切割含有缺刻的双链DNA。本产品常用于CRISPR/Cas9等导致的基因突变的鉴定。
T7EI切割错配碱基位点的活性如图1所示。需要特别注意的是T7EI能识别长度大于或等于2bp的插入、缺失或突变导致的错配DNA，不能识1bp的插入、缺失或突变。
图1．T7 Endonuclease I (T7EI)切割位点示意图。X，代表错配位点。
T7EI常用于CRISPR/Cas9、TALEN或以及其它基因编辑工具形成的突变体检测，也常用于基因点突变和SNP的检测，也可以用于分解四方向交叉DNA或分支DNA、检测或切割异源双链DNA和缺刻DNA，以及随机切割线性DNA(借助线性DNA分子内或分子间部分配对形成的不完全匹配双链DNA)用于进行鸟枪法克隆和测序等。
保存：-20℃，有效期1年。
大肠杆菌表达的T7噬菌体基因3的重组蛋白。
One unit is defined as the amount of enzyme required to convert> 90% of 1μg of supercoiled cruciform pUC(AT) to> 90% linear form in a total reaction volume of 50μL in 1hour at 37℃。
10×Reaction Buffer：
500mM NaCl,100mM Tris-HCl,100mM MgCl2,10mM DTT,pH7.9。
纯度大于95%，不含T7EI之外的DNA内切酶和外切酶，不含RNA酶，不含磷酸酯酶。
85℃加热15min或加入EDTA至终浓度20mM可以使T7EI失活。
相关搜索：T7核酸内切酶I，T7EI，T7 Endonuclease I
T7EI切割错配碱基位点的活性如图1所示。需要特别注意的是T7EI能识别长度大于或等于2bp的插入、缺失或突变导致的错配DNA，不能识1bp的插入、缺失或突变。
图1．T7 Endonuclease I (T7EI)切割位点示意图。X，代表错配位点。
T7EI常用于CRISPR/Cas9、TALEN或以及其它基因编辑工具形成的突变体检测，也常用于基因点突变和SNP的检测，也可以用于分解四方向交叉DNA或分支DNA、检测或切割异源双链DNA和缺刻DNA，以及随机切割线性DNA(借助线性DNA分子内或分子间部分配对形成的不完全匹配双链DNA)用于进行鸟枪法克隆和测序等。
| 组分 | 250U | 1250U | 5000U |
| T7 Endonuclease I (10U/μL) | 25μL | 125μL | 500μL |
| 10×Reaction Buffer | 200μL | 500μL | 1.2mL |
| Control template(100ng/μL) | 10μL | 20μL | 50μL |
保存：-20℃，有效期1年。
大肠杆菌表达的T7噬菌体基因3的重组蛋白。
One unit is defined as the amount of enzyme required to convert> 90% of 1μg of supercoiled cruciform pUC(AT) to> 90% linear form in a total reaction volume of 50μL in 1hour at 37℃。
10×Reaction Buffer：
500mM NaCl,100mM Tris-HCl,100mM MgCl2,10mM DTT,pH7.9。
纯度大于95%，不含T7EI之外的DNA内切酶和外切酶，不含RNA酶，不含磷酸酯酶。
85℃加热15min或加入EDTA至终浓度20mM可以使T7EI失活。
- T7EI酶切野生型/突变体形成的杂合双链DNA的效果(图2)：
图2．百奥莱博的T7EI和国际知名品牌的同类产品酶切野生型/突变体形成的杂合双链DNA效果图。使用高保真酶分别PCR扩增不带突变位点的野生型DNA片段(WT，800bp)以及有5个碱基突变的DNA片段(Mutant，800bp)，经电泳检测它们的PCR产物均为单一条带后，按图所示将200ng的野生型片段、200ng的突变体片段及100ng突变体片段与100ng野生型混合物分别经变性、退火和复性处理(95℃ 5min,95℃～85℃～2℃/second,85℃～25℃～0.1℃/second)后加入10U T7EI，37℃酶切30min，然后进行1%的琼脂糖凝胶电泳检测。如图所示，野生型与突变体的混合物经退火后部分片段会形成5个碱基的错配loop区并被T7EI识别和酶切，800bp的片段被切割成600bp和200bp两个片段，而单独的野生型或单独的突变体则不会被切割。 - 百奥莱博的T7EI酶兼容性好，与百奥莱博的多种PCR扩增体系是完全兼容的(图3)。对于PCR产物通常无须任何纯化处理即可用于本产品的酶切鉴定。
图3．百奥莱博的T7 Endonuclease I (T7EI)对于百奥莱博不同PCR buffer的兼容效果。酶切体系为20μL，将本试剂盒提供的Control Template分别加入不同的PCR buffer体系至PCR buffer为1×，混匀后，取5μL至一新的离心管中作为酶切底物。随后加入2μL 10×Reaction Buffer、12μL超纯水和1μL T7EI (10U/μL)，混匀后37℃酶切30min，1%的琼脂糖凝胶电泳检测。如图所示，本产品和这些PCR buffer体系都可以很好兼容。因此在目的条带正确且单一时可以不经过纯化直接取5μL PCR产物至酶切体系中变性退火后进行酶切反应。- 不加T7EI；
- 加T7EI，用水取代PCR buffer；
- 10×PCR Buffer (with Mg2+)，来自Taq DNA聚合酶(货号：YTB4084)；
- 10×BalbTaq Buffer (with Mg2+)，BalbTaq DNA聚合酶(货号：YT373)；
- 10×Pfu Buffer (with Mg2+)，来自Pfu DNA聚合酶(货号：YT372)；
- 10×BalbFusion Buffer (with Mg2+)，来自BalbFusion DNA聚合酶(货号：YT374、YT375)；
- 10×Hot-Start PCR Buffer，来自热启动Taq DNA聚合酶(货号：YTB3004)；
- 10×BalbAmp Buffer，来自BalbAmp超长DNA聚合酶(货号：YTB4085)；
- 10×BalbAmp II Buffer，来自BalbAmp超长DNA聚合酶II(货号：YTB4086)；
- 10×BloodTaq PCR Buffer，来自全血DNA聚合酶(货号：YTB4081)；
- 10×BloodTaq HF PCR Buffer，来自高保真全血DNA聚合酶(货号：YTB4082)；
- 10×PlantTaq PCR Buffer，来自耐叶绿素DNA聚合酶(货号：YTB4083)。
- 不加T7EI；
- T7EI是一种依赖于底物结构并进行选择性酶切的酶，其对不同的DNA底物显示出不同的反应活性。因此，切割特定底物时，必须控制好酶量和反应时间。
- 反应温度超过42℃时，会增加其非特异性酶切的活性；而反应温度超过55℃则会降低其酶活性。
- 按下表配置反应体系(以20μL体系为例)。通常PCR产物推荐使用5μL，过多的PCR产物由于PCR buffer的存在可能会干扰后续的酶切反应。
Component Positive Control Negative Control Control template PCR product(约200ng) 5μL 5μL 2μL 10 x T7 Endonuclease I Reaction Buffer 2μL 2μL 2μL Nuclease-free Water 12μL 12μL 15μL - 退火反应：
Step Temperature Time 1 95℃ 5min 2 95℃～85℃ –2℃/sec 3 85℃～25℃ –0.1℃/sec 4 4℃ Hold - 在上述19μL退火后的体系中加入1μL T7EI，37℃孵育15～30min。通常孵育15min已经足够，如果希望确保获得更好的酶切效果可以孵育30min。
- 85℃加热15min或加入1.5μL的0.25M EDTA终止酶切反应。
- 将酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳，拍照观察，并分析酶切效果。Control Template酶切后的效果请参考图3。
相关搜索：T7核酸内切酶I，T7EI，T7 Endonuclease I