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末端脱氧核糖核酸转移酶(TdT)是一种非模板依赖的DNA聚合酶，可以催化在寡核苷酸、单链或双链DNA的3'羟基端加上dNTP。可以催化的寡核苷酸的最短长度为3个核苷酸。有报道TdT也可以在RNA的3'羟基端加上NTP，但对于RNA的催化活性要弱于DNA。

• 寡核苷酸或DNA 3'羟基末端标记。
  
• DNA末端加尾(DNA tailing)。
  
• 5'-RACE。
  
• 合成同一种脱氧核苷酸的寡聚链等。

由大肠杆菌表达，表达基因的来源为小牛胸腺。


一个活性单位是指37℃条件下，60分钟内催化1nmol dNTP加入到多聚核苷酸3'羟基末端中所需的酶量。
酶活性检测条件：200mM potassium cacodylate (pH7.2),1mM CoCl2,0.1mM DTT,0.01% (v/v) Triton X-100,10μM
oligo(dT)10,1mM dTTP and 0.4MBq/ml[3H]-dTTP。

组分	500U	2500U
TdT(5U/μL)	100μL	500μL
5×Reaction Buffer	300μL	1.5mL

保存：-20℃


100mM KAc(pH6.8)，2mM 2-mercaptoethanol，0.01% (v/v) Triton X-100，50% (v/v) glycerol。


5×Reaction Buffer：
0.125M Tris (pH7.2 at 25℃)，1M potassium cacodylate，0.05% (v/v) Triton X-100，5mM CoCl2。


不含DNA内切酶和外切酶，不含RNase。

• 70℃加热10分钟或加入适量EDTA均可导致TdT失活。
  
• 金属离子螯合剂，较高浓度的铵根离子、氯离子、碘离子和磷酸根均对TdT有抑制作用。

• DNA 3'末端标记：
  
  • 参考如下表格设置反应体系：
    

    成分	用量
    待标记DNA	10pmol of 3'-termini
    5×Reaction Buffer	10μL
    [α-32P]-ddATP,～10TBq/mmol(3000Ci/mmol)	1.85 MBq(50μCi)
    TdT(5U/μL)	4μL
    无核酸酶去离子水	至50μL

  • 按上表设置好反应体系后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
    
  • 37℃孵育20分钟。
    
  • 70℃孵育20分钟或加入5μL 0.5M EDTA终止反应。
    
    • 标记的效率和3'羟基末端的类型有关，3'突出末端的标记效率要显著高于3'缩进末端或平末端的标记效率。
• DNA末端加尾(DNA Tailing)：
  
  • 参考如下表格设置反应体系：
    

    成分	用量
    DNA片断	1pmol of 3'-termini
    5×Reaction Buffer	4μL
    dATP or dTTP	130pmol(20 μCi)
    或dGTP or dCTP(四种中通常只需加入一种)(3000 Ci/mmol)	60pmol
    TdT(5U/μL)	1.5μL
    无核酸酶去离子水	至20μL

  • 按上表设置好反应体系后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
    
  • 37℃孵育15分钟。
    
  • 70℃孵育15分钟或加入5μL 0.5M EDTA终止反应。
    • 在上述反应条件下，每个3'羟基末端可以加上100～130个dA或dT，或20～30个dC或dG。
• 其他用途可以参考上述用途或适当的文献资料进行。

相关搜索：末端脱氧核糖核酸转移酶(TdT)，TdT酶，Terminal Deoxynucleotidyl Transferase