产品货号：
YTB4132
中文名称：
热敏性双链DNA酶
英文名称：
Thermolabile dsDNase
产品规格：
50T|250T
发货周期：
1～3天
产品价格：
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热敏性双链DNA酶(Thermolabile dsDNase)是一种用于快速、安全地去除RNA样品中基因组DNA(gDNA)污染的重组表达的热敏感性双链脱氧核糖核酸酶。本制品可特异性剪切双链DNA(dsDNA)中的磷酸二酯键，产生带有5'-磷酸与3'-羟基末端的寡核苷酸的核酸内切酶。
本制品对RNA或单链DNA如cDNA和引物几乎无酶切活性，在镁离子存在的情况下，本制品对dsDNA的酶切活性比对ssDNA的酶切活性约高5000倍。并且本制品55℃加热5分钟即可被失活，因此非常适合用于在反转录之前快速便捷地去除RNA样品中的基因组DNA污染。
本制品在20～40℃保持高活性状态，比牛DNase I的活力约高30倍，但可通过55℃热处理5分钟而完全且不可逆地灭活。
- 双链DNA特异性好：特异性消化双链DNA而对单链DNA及RNA无活性；
- 热不稳定性：使用相对温和的55℃加热处理5分钟可使Thermolabile dsDNase不可逆失活；
- 活性强：2分钟孵育即可将RNA样品中所含有的基因组DNA或1μg基因组DNA消化完毕。
制备不含DNA的RNA样品；反转录前RNA样品中去除基因组DNA污染；体外T3、T7、SP6等RNA Polymerases催化的RNA合成后消化去除模板DNA。
图1．本制品的特异性及热敏感性检测效果图。
- 我司的Thermolabile dsDNase、同类产品(Competitor dsDNase)及DNase I溶液(货号：YT411)消化400bp双链DNA (dsDNA)或45nt单链DNA (ssDNA)的效果对比图。反应体系均为10μL，dsDNA与ssDNA总量均为400ng，反应条件为37℃孵育2min。图中可见Thermolabile dsDNase特异性消化dsDNA，而对ssDNA无活性，DNase I对于dsDNA和ssDNA没有选择性。
- 55℃孵育5min可使Thermolabile dsDNase完全失活。400ng长度约400bp的PCR产物，加入Thermolabile dsDNase后37℃孵育2min，或者先55℃孵育5min后再37℃孵育2min。
Pichia pastoris重组表达Thermolabile dsDNase基因，分子量43kDa。
| 组分 | 50T | 250T |
| 热敏性dsDNase | 50μL | 250μL |
| 10×Reaction Buffer | 100μL | 300μL |
保存：-20℃
25mM Tris-HCl (pH7.5)，2mM MgCl2，10mM NaCl，0.01%(v/v) Triton X-100，50%(v/v) glycerol。
10×Reaction Buffer：
200mM Tris-HCl(pH8.3)，60mM MgCl2。
不含其它DNA内切酶与外切酶活性，不含RNA酶活性。
55℃加热5min可使Thermolabile dsDNase完全失活；金属离子螯合剂如EDTA、毫摩尔浓度的锌等金属离子、低于0.1%的SDS、高盐以及还原剂如DTT和巯基乙醇均可抑制Thermolabile dsDNase的酶活性。
- 本制品用于反转录反应前RNA样品中去除基因组DNA污染时，必须注意RNase-free的相关操作规范。
- 本制品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。
- 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
- 使用本制品推荐反应体系为10μL。待处理的RNA样品中依次加入1μL的Thermolabile dsDNase和1μL 10×Reaction Buffer，补充RNase-free water至10μL，混匀后置于37℃水浴孵育2min，即可有效去除RNA样品中的基因组DNA污染或DNA模板等双链DNA。
- 经过Thermolabile dsDNase处理的RNA样品，后续如果用于反转录，必须在55℃加热5min以充分灭活Thermolabile dsDNase。尽管Thermolabile dsDNase不会消化单链DNA，但单链的cDNA形成复杂的二级结构中含有双链时，还是有可能被Thermolabile dsDNase所识别并剪切的，因此在反转录前必须在55℃加热5min以充分灭活Thermolabile dsDNase。
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