本制品是一种重组表达的高度特异性识别SUMO化修饰或SUMO结构域，并水解SUMO羧基端(C端) x-Gly-Gly-x肽段中Gly-Gly后的肽键，从而去除SUMO化修饰或者去除SUMO融合表达蛋白中SUMO结构域的蛋白酶。本制品是一种来自Saccharomyces cerevisiae的高活性的半胱氨酸蛋白酶Ulp1基因片段的重组表达蛋白。
SUMO Protease进行酶切时的最适pH值为8.0，最佳酶切温度为30℃。但SUMO Protease在较宽的pH范围(6.0-10.0)在较宽的温度范围(2～30℃)，较宽的离子强度范围(0～400mM NaCl)内均具有较高的酶活性。在实际操作过程中，为尽量保持目的蛋白的结构和生物活性，建议在4℃用SUMO Protease酶切过夜。SUMO Protease在还原剂DTT(0.5～2mM)存在的情况下酶切活性更高，酶切体系中加入适当浓度DTT可以显着提高酶切效率，尤其是在长时间的酶切过程中，例如4℃酶切过夜。
推荐使用带有His/SUMO双标签的百奥莱博研发生产的原核表达质粒pET-N-His-PreScission-SUMO (货号：YTB4021)用于融合蛋白的构建，在使用镍柱纯化介质(GoldBalb His-tag Purification Resin，耐还原螯合型，货号：YT616和GoldBalb His-tag Purification Resin，耐变性剂型，货号：YTB4204)纯化带有His/SUMO双标签的融合蛋白后，使用SUMO Protease可以将His和SUMO标签同时切除，而目的蛋白的N端可以不残留任何额外的氨基酸残基。百奥莱博的SUMO Protease因为带有His标签，也可以和融合蛋白的His-SUMO标签一起通过与镍柱结合而非常方便地一起去除。
SUMO是一种泛素样蛋白，是一种非常常见蛋白翻译后修饰(PTM)，对于蛋白的稳定性、生物学功能有重要的调节作用。SUMO也常被作为一种非常高效和有用的标签用于蛋白的表达纯化，将SUMO作为标签和目的蛋白的氨基端(N端)进行融合表达时可以改善目的蛋白的折叠，提高目的蛋白的可溶性和产量。随后使用SUMO Protease对SUMO融合蛋白进行酶切，去除SUMO标签就可以获得完全没有标签蛋白干扰的目的蛋白。因此SUMO Protease可以高效且特异性地用于从重组融合蛋白上完全切割去除SUMO标签，从而最大限度地减少了对目的蛋白结构和功能的影响。
| 组分 | 200U | 1000U | 5000U |
| SUMO Protease(10U/μL) | 20μL | 100μL | 500μL |
| 10×SUMO Protease Buffer + Salt | 400μL | 2mL | 10mL |
| 10×SUMO Protease Buffer–Salt | 400μL | 2mL | 10mL |
保存：-80℃，避免反复冻融，有效期一年。
本制品200U、1000U和5000U包装，分别可用于约0.4mg、2mg和10mg带有SUMO标签的融合蛋白的酶切。
25mM Tris-HCl (pH8.0)，250mM NaCl，0.1% Igepal，0.5mM DTT，50% (v/v) glycerol。
- 10×SUMO Protease Buffer - Salt：
500mM Tris-acetate，2% Igepal，10mM DTT，pH8.0@25℃。 - 10×SUMO Protease Buffer + Salt：
500mM Tris-acetate，1.5M NaCl，2% Igepal，10mM DTT，pH8.0@25℃。
通过大肠杆菌重组、表达和纯化而获得，纯度≥95%。
1个活性单位是指30℃条件下，1小时内将2μg底物的85%以上成功切割所需的酶量。
SUMO Protease酶活性鉴定结果可参考图1。
图1．本制品酶切带有SUMO标签的目的蛋白的效果图。每个样品纯化的SUMO融合蛋白2μg，SUMO Protease的用量从左至右依次为0、0.125、0.25、0.5、1和2U，30℃酶切反应1h后取样进行SDS-PAGE电泳和考马斯亮蓝染色。
图A使用的酶切缓冲液为1×SUMO Protease Buffer + Salt，
图B使用的酶切缓冲液为1×SUMO Protease Buffer - Salt。
- 为获得最好的酶切效果，须保证待酶切的重组蛋白为完全纯化的蛋白。
- 对于大部分融合蛋白，SUMO Protease最理想的反应缓冲液液中NaCl的浓度为150mM。根据实际情况可在0～300mM之间调节NaCl的浓度以达到最佳的酶切效果。
- 融合蛋白酶切反应中咪唑的终浓度不应高于150mM，否则可能会影响SUMO Protease的酶切效率。
- 酶切条件的优化：
由于不同目的蛋白具有不同的特性，所以在实际使用时，建议对酶和待酶切的目的蛋白的比例进行适当优化，以下是一个简单的估计酶用量的实验方案。- 按下表在1.5mL离心管中配置反应体系(以20μL体系为例，无盐和有盐的缓冲液可任选一种，或两种同时做平行实验)：
成分 用量 H2O X μL 10×Reaction Buffer–/+ Salt 20μL SUMO-tag Protein (20μg) Y μL SUMO Protease (10U/μL) 0、0.5或1μL 总体积 200μL
注：如果带有SUMO标签的目的蛋白浓度为5μg/μl，那么Y = 20/5 = 4，即须使用4μL 5μg/μl的目的蛋白。 - 将反应混合物放置于30℃反应1、2、4或6h。如果目的蛋白在30℃不太稳定，可以考虑4℃反应过夜(16h左右)。正常情况下按照上述反应体系，无论30℃反应1h还4℃反应16h，应该都可以充分剪切并去除SUMO标签的。
- 带有SUMO标签的目的蛋白酶切反应的温度与时间，可以视情况进行适当调整，具体参考如下表格。
反应温度 反应时间 4℃ 15-16h 16℃ 4h 25℃ 1.5h 30℃ 1h - 取20μL样品进行SDS-PAGE电泳分析，确定反应所需的合适酶量。在实际操作过程中，如果有必要，还可以在上述反应的不同时间点取少量样品，后续通过电泳分析来确定优化的反应时间。
注：如果目的蛋白要求低温，可将反应体系置于4℃，延长反应时间，并适当增加SUMO Protease用量，以确保酶切效果。
- 按下表在1.5mL离心管中配置反应体系(以20μL体系为例，无盐和有盐的缓冲液可任选一种，或两种同时做平行实验)：
- 酶切与纯化：
后续可以按照上述优化的反应条件，放大反应体系进行目的蛋白SUMO标签的切除反应。反应结束后，可以通过镍柱结合去除切除下来的带有His标签的SUMO标签，以及带有His标签的本制品SUMO Protease，从而获得高纯度的去除了SUMO标签的目的蛋白。
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