产品货号：
YT513
中文名称：
T4多聚核苷酸激酶
英文名称：
T4 Polynucleotide Kinase,10U/μL
产品规格：
100U|500U
发货周期：
1～3天
产品价格：
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T4多聚核苷酸激酶是一种多聚核苷酸5'羟基激酶，T4多聚核苷酸激酶的激酶活性在C-末端附近，而磷酸酯酶活性在N-末端附近。
可以催化ATP的γ位磷酸基团向单链或双链DNA、RNA、寡核苷酸或带有3'磷酸基团的单核苷酸的5'羟基转移。其他NTP也可产生相同的反应：
5'-OH + NTP → 5'-P + NDP
上述的磷酸化反应是可逆的。当缺失ATP并且存在ADP的情况下，T4多聚核苷酸激酶可以显示出5'磷酸酯酶的活性，催化单链或双链DNA、RNA、寡核苷酸或带有3'磷酸基团的单核苷酸的5'磷酸基团向ADP的转移形成ATP。其他NTP也可产生相同的反应：
5'-P + NDP → 5'-OH + NTP(最适pH为6.4左右)
当ATP和ADP都适量存在时，T4多聚核苷酸激酶可以催化单链或双链DNA、RNA、寡核苷酸或带有3'磷酸基团的单核苷酸的5'磷酸基团和ATP的γ位磷酸基团之间的交换反应。其他NTP也可产生相同的反应：
5'-P + NTP + NDP→5'-P + NDP + NTP
T4多聚核苷酸激酶同时具有3'磷酸酯酶活性，可催化3'磷酸化的多聚核苷酸的去磷酸化：
3'-P → 3'-OH + Pi(最适pH为5.9左右)
由大肠杆菌表达，表达基因的来源为T4嗜菌体。
37℃ 30分钟内，将转移ATP上1nmol γ-磷酸基团转移到DNA 5'-OH末端所需的酶量定义为1个活性单位。
活性检测条件：
100mM Tris-HCl(pH8.0)，10mM MgCl2，5mM DTT，0.5mM 5'-OH DNA，0.05mM ATP，0.1MBq/ml [γ-33P]-ATP。
保存：-20℃
20mM Tris-HCl(pH7.5)，25mM KCl，0.1mM EDTA，2mM DTT，50% glycerol。
10×Reaction Buffer A(用于磷酸化反应)：
500mM Tris-HCl(pH7.6)，100mM MgCl2，50mM DTT，1mM spermidine，1mM EDTA。
10×Reaction Buffer B(用于交换反应)：
500mM imidazole-HCl(pH6.4)，0.18M MgCl2，50mM DTT，1mM spermidine，1mM EDTA，1mM ADP。
75℃加热10分钟可使T4 Polynucleotide Kinase失活，加入EDTA也可使T4 Polynucleotide Kinase失活。金属离子螯合剂、磷酸盐、铵根离子、大于50mM的KCl和NaCl均可显著抑制T4 Polynucleotide Kinase的活性。
不含DNA内切酶和外切酶，不含RNA酶。
相关搜索：T4多聚核苷酸激酶，T4 PNK，T4 Polynucleotide Kinase,10U/μL
可以催化ATP的γ位磷酸基团向单链或双链DNA、RNA、寡核苷酸或带有3'磷酸基团的单核苷酸的5'羟基转移。其他NTP也可产生相同的反应：
5'-OH + NTP → 5'-P + NDP
上述的磷酸化反应是可逆的。当缺失ATP并且存在ADP的情况下，T4多聚核苷酸激酶可以显示出5'磷酸酯酶的活性，催化单链或双链DNA、RNA、寡核苷酸或带有3'磷酸基团的单核苷酸的5'磷酸基团向ADP的转移形成ATP。其他NTP也可产生相同的反应：
5'-P + NDP → 5'-OH + NTP(最适pH为6.4左右)
当ATP和ADP都适量存在时，T4多聚核苷酸激酶可以催化单链或双链DNA、RNA、寡核苷酸或带有3'磷酸基团的单核苷酸的5'磷酸基团和ATP的γ位磷酸基团之间的交换反应。其他NTP也可产生相同的反应：
5'-P + NTP + NDP→5'-P + NDP + NTP
T4多聚核苷酸激酶同时具有3'磷酸酯酶活性，可催化3'磷酸化的多聚核苷酸的去磷酸化：
3'-P → 3'-OH + Pi(最适pH为5.9左右)
- 寡核苷酸、DNA或RNA的5'末端标记，用作Southern、Northern、EMSA等的探针，凝胶电泳的marker，DNA测序引物，PCR引物等；
- 使寡核苷酸、DNA或RNA的5'端磷酸化，确保后续连接反应顺利进行；
- 催化3'磷酸化的单核苷酸的5'磷酸化，使该单核苷酸可以和DNA或RNA的3'末端连接；
- 去除3'端磷酸基团。
由大肠杆菌表达，表达基因的来源为T4嗜菌体。
37℃ 30分钟内，将转移ATP上1nmol γ-磷酸基团转移到DNA 5'-OH末端所需的酶量定义为1个活性单位。
活性检测条件：
100mM Tris-HCl(pH8.0)，10mM MgCl2，5mM DTT，0.5mM 5'-OH DNA，0.05mM ATP，0.1MBq/ml [γ-33P]-ATP。
| 组分 | 100U | 500U |
| T4多聚核苷酸激酶(10U/μL) | 10μL | 50μL |
| 10×Reaction Buffer A | 80μL | 400μL |
| 10×Reaction Buffer B | 40μL | 200μL |
| 24% PEG Solution | 40μL | 200μL |
保存：-20℃
20mM Tris-HCl(pH7.5)，25mM KCl，0.1mM EDTA，2mM DTT，50% glycerol。
10×Reaction Buffer A(用于磷酸化反应)：
500mM Tris-HCl(pH7.6)，100mM MgCl2，50mM DTT，1mM spermidine，1mM EDTA。
10×Reaction Buffer B(用于交换反应)：
500mM imidazole-HCl(pH6.4)，0.18M MgCl2，50mM DTT，1mM spermidine，1mM EDTA，1mM ADP。
75℃加热10分钟可使T4 Polynucleotide Kinase失活，加入EDTA也可使T4 Polynucleotide Kinase失活。金属离子螯合剂、磷酸盐、铵根离子、大于50mM的KCl和NaCl均可显著抑制T4 Polynucleotide Kinase的活性。
不含DNA内切酶和外切酶，不含RNA酶。
- 铵盐沉淀获得的DNA不能用于T4多聚核苷酸激酶的标记反应。铵盐可强烈抑制T4多聚核苷酸激酶的酶活性。
- PEG可促进磷酸化反应速率和效率；交换反应体系应加入PEG。
- 酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。
- DNA 5'末端标记：
- 参考如下表格设置反应体系：
成分 用量 待磷酸化DNA 1～20pmol(5'末端) 10×Reaction Buffer A 2μL [γ-32P or γ-33P]-ATP (3,000Ci/mmol) 20pmol 补充无核酸酶的去离子水 至19μL T4多聚核苷酸激酶(10U/μL) 1μL - 按上表设置好反应体系后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
- 37℃孵育30分钟。
- 加入1μL 0.5M EDTA(pH8.0)混匀，以终止反应。
- 后续可以使用酚氯仿抽提、乙醇沉淀等方法纯化标记的DNA，也可以使用适当的DNA纯化试剂盒进行纯化。
PCR产物DNA纯化试剂盒(货号：YT009)可以向百奥莱博订购。
- 参考如下表格设置反应体系：
- DNA 5'末端磷酸化：
- 参考如下表格设置反应体系：
成分 用量 待磷酸化DNA 1～20pmol(5'末端) 10×Reaction Buffer A 2μL 0.1mM ATP 1μL 补充无核酸酶的去离子水 至19μL T4多聚核苷酸激酶(10U/μL) 1μL - 按上表设置好反应体系后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
- 37℃孵育30分钟。
- 加入1μL 0.5M EDTA(pH8.0)混匀，以终止反应。
- 后续可以使用酚氯仿抽提、乙醇沉淀等方法纯化标记的DNA，也可以使用适当的DNA纯化试剂盒进行纯化。
PCR产物DNA纯化试剂盒(货号：YT009)可以向百奥莱博订购。
- 参考如下表格设置反应体系：
- 通过交换反应进行DNA 5'末端标记：
- 参考如下表格设置反应体系：
成分 用量 待磷酸化DNA 1～20pmol (5'末端) 10×Reaction Buffer B 2μL [γ-32P or γ-33P]-ATP (3,000Ci/mmol) 40pmol 24% PEG Solution 4μL 补充无核酸酶的去离子水 至19μL T4多聚核苷酸激酶(10U/μL) 1μL - 按上表设置好反应体系后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
- 37℃孵育30分钟。
- 加入1μL 0.5M EDTA(pH8.0)混匀，以终止反应。
- 后续可以使用酚氯仿抽提、乙醇沉淀等方法纯化标记的DNA，也可以使用适当的DNA纯化试剂盒进行纯化。
PCR产物DNA纯化试剂盒(货号：YT009)可以向百奥莱博订购。
- 参考如下表格设置反应体系：
相关搜索：T4多聚核苷酸激酶，T4 PNK，T4 Polynucleotide Kinase,10U/μL