产品货号：
YT512
中文名称：
TdT末端转移酶
英文名称：
Terminal Deoxynucleotidyl Transferase
产品规格：
500U
发货周期：
1～3天
产品价格：
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TdT酶是一种非模板依赖的DNA聚合酶，可以催化在寡核苷酸、单链或双链DNA的3'羟基端加上dNTP。可以催化的寡核苷酸的最短长度为3个核苷酸。
由大肠杆菌表达，表达基因的来源为小牛胸腺。
37℃，60分钟内，催化1nmol dNTP加入到多聚核苷酸3'羟基末端中所需的酶量定义为1个活性单位。
酶活性检测条件：
200mM potassium cacodylate(pH7.2),1mM CoCl2,0.1mM DTT,0.01%(v/v)Triton X-100,10μM oligo(dT)10,1mM dTTP and 0.4MBq/ml[3H]-dTTP。
保存：-20℃
100mM KAc(pH6.8),2mM 2-mercaptoethanol,0.01%(v/v)Triton X-100,50%(v/v)glycerol。
5×Reaction Buffer：
0.125M Tris(pH7.2 at 25℃),1M potassium cacodylate,0.05%(v/v)Triton X-100,5mM CoCl2。
不含DNA内切酶和外切酶，不含RNase。
相关搜索：TdT末端转移酶，末端转移酶，TdT酶，末端脱氧核糖核酸转移酶，Terminal Deoxynucleotidyl Transferase
- 寡核苷酸或DNA 3'羟基末端标记；
- DNA末端加尾(DNA tailing)；
- 5'-RACE；
- 合成同一种脱氧核苷酸的寡聚链。
由大肠杆菌表达，表达基因的来源为小牛胸腺。
37℃，60分钟内，催化1nmol dNTP加入到多聚核苷酸3'羟基末端中所需的酶量定义为1个活性单位。
酶活性检测条件：
200mM potassium cacodylate(pH7.2),1mM CoCl2,0.1mM DTT,0.01%(v/v)Triton X-100,10μM oligo(dT)10,1mM dTTP and 0.4MBq/ml[3H]-dTTP。
| 组分 | 规格 |
| TdT(20U/μL) | 25μL |
| 5×Reaction Buffer | 400μL |
保存：-20℃
100mM KAc(pH6.8),2mM 2-mercaptoethanol,0.01%(v/v)Triton X-100,50%(v/v)glycerol。
5×Reaction Buffer：
0.125M Tris(pH7.2 at 25℃),1M potassium cacodylate,0.05%(v/v)Triton X-100,5mM CoCl2。
不含DNA内切酶和外切酶，不含RNase。
- 70℃加热10分钟或加入适量EDTA均可导致TdT酶失活。
- 金属离子螯合剂，较高浓度的铵根离子、氯离子、碘离子和磷酸根均对TdT酶有抑制作用。
- TdT酶使用时宜放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。
- 本制品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗。
- 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
- DNA 3'末端标记：
- 参考如下表格设置反应体系：
成分 用量 待标记DNA 10pmol of 3'-termini 5×Reaction Buffer 10μL [α-32P]-ddATP,～10TBq/mmol(3000Ci/mmol) 1.85 MBq(50μCi) TdT(20U/μL) 2μL 无核酸酶的去离子水 至50μL - 按上表设置好反应体系后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
- 37℃孵育15分钟。
- 70℃孵育15分钟或加入5μL 0.5M EDTA终止反应。
说明：标记的效率和3'羟基末端的类型有关，3'突出末端的标记效率要显著高于3'缩进末端或平末端的标记效率。
- 参考如下表格设置反应体系：
- DNA末端加尾(DNA Tailing)：
- 参考下表格设置反应体系：
成分 用量 DNA片断 1pmol of 3'-termini 5×Reaction Buffer 4μL dATP or dTTP 130pmol(20μCi) 或dGTP or dCTP(四种中通常只需加入一种)
(3000 Ci/mmol)60pmol TdT(20U/μL) 1.5μL 无核酸酶的去离子水 至20μL - 按上表设置好反应体系后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
- 37℃孵育15分钟。
- 70℃孵育15分钟或加入5μL 0.5M EDTA终止反应。
说明：在上述反应条件下，每个3'羟基末端可以加上100-130个dA或dT，或20-30个dC或dG。
- 参考下表格设置反应体系：
- 其他用途可以参考上述用途或适当的文献资料进行。
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