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RNase H是一种核糖核酸内切酶，可以特异性地水解DNA-RNA杂合链中的RNA，但不能水解单链或双链DNA或RNA中的磷酸二酯键，即不能消化单链或双链DNA或RNA。

• DNA-RNA杂合链中去除RNA，例如cDNA第二条链合成前去除mRNA；
  
• 通过互补的DNA序列实现对RNA的定点剪切；
  
• 除去杂交到poly(dT)上的mRNA中的poly(A)；
  
• 体外多腺苷酸化反应(polyadenylation reaction)产物研究。

E.coli MRE-600细胞，分子量约18.4kDa(单体)。


37℃，20分钟内，能够催化1nmol杂合双链中的RNA形成酸可溶性核糖核苷酸形式所需的酶量定义为1个活性单位。
活性检测条件：20mM Tris-HCl(pH7.8)，40mM KCl，8mM MgCl₂，1mM DTT，24μM[3H]-poly(A).poly(dT)，0.03mg/mL BSA，4%(v/v)glycerol。

组分	规格
RNase H(5U/μL)	20μL
10×Reaction Buffer	200μL

保存：-20℃


25mM HEPES-KOH(pH8.0)，50mM KCl，1mM DTT，1mM EDTA，0.1mg/mL BSA，50%(v/v)glycerol。



10×Reaction Buffer：
200mM Tris-HCl(pH7.8)，400mM KCl，80mM MgCl₂，10mM DTT。


不含DNA内切酶和外切酶，不含其它核糖核酸酶。

• 65℃加热10分钟可使RNase H失活。
  
• 金属离子螯合剂和巯基封闭剂均能抑制RNase H活性。

• RNase H使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。
  
• 本制品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• DNA-RNA杂合链中去除RNA：
  
  • 用反转录酶，例如BalbRT M-MuLV反转录酶或BalbRT M-MuLV反转录酶(RNase H-)合成cDNA第一条链，70℃孵育10分钟终止反应。
    
  • 在冰浴上向已经合成第一条链的20μL反应体系中依次加入如下试剂：
    

    成分	用量
    10×Reaction Buffer	2μL
    无核酸酶去离子水	17.8μL
    RNase H(5U/μL)	0.2μL

    
    
  • 按上述体系配好之后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
    
  • 37℃孵育1小时。
    
  • 加入2.5μL 0.5M EDTA(pH8.0)混匀，以终止反应。
    
  • 后续可以使用酚氯仿抽提、乙醇沉淀等方法纯化合成的双链cDNA，也可以使用适当的DNA纯化试剂盒进行纯化。PCR产物DNA纯化试剂盒(货号：YT009)可以向百奥莱博订购。
    说明：其他情况DNA-RNA杂合链中去除RNA的条件可以参考上述条件进行。RNase H反应的pH范围约在7.5-8.3均可。
• 杂合链中RNA的去除和cDNA第二链的合成：
  
  • 用反转录酶，例如BalbRT M-MuLV反转录酶(货号：YT392)、BalbRT M-MuLV反转录酶(RNase H-)(货号：YT393)或BalbRT cDNA第一链合成试剂盒(货号：YT395)合成cDNA第一条链，70℃孵育10分钟终止反应。
    
  • 在冰浴上向已经合成第一条链的20μL反应体系中依次加入如下试剂：
    

    成分	用量
    Reaction Buffer(10X)for DNA Polymerase I	8μL
    无核酸酶去离子水	68.8μL
    RNase H(5U/μl)	0.2μL
    DNA Polymerase I,E.coli	3μL(30U)

    
    .按上述体系配好之后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
    
  • 15℃孵育2小时。(
    注意：反应温度不能超过15℃)
    
  • 加入5μL 0.5M EDTA(pH8.0)混匀，以终止反应。
    
  • 后续可以使用酚氯仿抽提、乙醇沉淀等方法纯化合成的双链cDNA，也可以使用适当的DNA纯化试剂盒进行纯化。PCR产物DNA纯化试剂盒(货号：YT009)可以向百奥莱博订购。
    注：Reaction Buffer(10X)for DNA Polymerase I：500mM Tris-HCl(pH7.5 at 25℃)，100mM MgCl₂，10mM DTT。
• 其他用途请参考上述用途或相关文献资料进行。

相关搜索：RNase H，核糖核酸酶H，Ribonuclease H