产品货号:
WE0239
中文名称:
T4 DNA连接酶
英文名称:
T4 DNA Ligase
产品规格:
100U|500U
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本制品是从表达T4 DNA Ligase基因的大肠杆菌经诱导表达后分离纯化而来的,催化相邻DNA链的5’磷酸基团和3’羟基基团以磷酸二酯键结合反应。该酶可催化平末端或粘性末端DNA之间的连接,还可修复双链DNA、RNA、DNA/RNA杂交双链中的单链切口。本制品可应用于DNA插入片段和载体DNA的粘性末端和平末端的连接,以及线性DNA的自身环化。
组分 | 100U | 500U |
T4 DNA Ligase(5U/μL) | 20μL | 100μL |
10×Ligation Buffer | 150μL | 750μL |
50% PEG Solution | 150μL | 750μL |
保存:-20℃
- T4 DNA Ligase的最终用量不要超过推荐的用量,否则影响连接效率。
- PEG可以极大提高平末端的连接效率,我们推荐加入终浓度为5% PEG Solution以提高平末端的连接效率。
- 为了提高转化效率,建议所加入连接产物的量不要超过感受态细胞体积的10%。
- 由于T4 DNA Ligase中含有甘油,比较粘稠容易挂壁,建议使用之前短暂离心将液体收集到管底,取样时枪头尽量不要深入液面太深以免粘在枪头上造成损失。
- 粘性末端的连接:
- 按以下体系配制反应液:
成分 用量 终浓度 线性载体DNA X μL 20~100ng 插入DNA片段 Y μL 插入片段:载体1:1~5:1 10×Ligation Buffer 2μL T4 DNA Ligase(5U/μL) 0.2μL 1U ddH2O 至20μL - 涡旋震荡,瞬间离心,将管壁上的溶液收集到管底。
- 反应条件:22℃孵育10分钟。
- 瞬间离心,将管壁上的溶液收集到管底,65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟以灭活T4 DNA Ligase。
- 可取5μL连接产物热击转化50μL感受态细胞或取1~2μL连接产物电击转化50μL感受态细胞。
注意:如需电击转化,推荐用乙醇沉淀法去除T4 DNA Ligase后进行电击转化。
- 按以下体系配制反应液:
- 平末端的连接:
- 反应体系:
成分 用量 终浓度 线性载体DNA X μL 20~100ng 插入DNA片段 Y μL 插入片段:载体1:1~5:1 10×Ligation Buffer 2μL - T4 DNA Ligase(5U/μL) 1μL 5U 50% PEG Solution 2μL 5% ddH2O 至20μL - - 涡旋震荡,瞬间离心,将管壁上的溶液收集到管底。
- 反应条件:22℃孵育1小时。
- 瞬间离心,将管壁上的溶液收集到管底,65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟以灭活T4 DNA Ligase。
- 可取5μL连接产物热击转化50μL感受态细胞或取1~2μL连接产物电击转化50μL感受态细胞。
注意:如需电击转化,推荐用乙醇沉淀法去除T4 DNA Ligase后进行电击转化。
- 反应体系:
- 线性DNA的自身环化:
- 反应体系:
成分 用量 终浓度 线性载体DNA X μL 5~50ng 10×Ligation Buffer 5μL - T4 DNA Ligase(5U/μL) 1μL 5U ddH2O 至50μL - - 涡旋震荡,瞬间离心,将管壁上的溶液收集到管底。
- 反应条件:粘性末端22℃孵育10分钟;平末端22℃孵育1小时。
- 瞬间离心,将管壁上的溶液收集到管底,65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟以灭活T4 DNA Ligase。
- 可取5μL连接产物热击转化50μL感受态细胞或取1~2μL连接产物电击转化50μL感受态细胞。
注意:如需电击转化,推荐用乙醇沉淀法去除T4 DNA Ligase后进行电击转化。
- 反应体系:
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