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T4 DNA连接酶图片
产品货号:
WE0239
中文名称:
T4 DNA连接酶
英文名称:
T4 DNA Ligase
产品规格:
100U|500U
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价

本制品是从表达T4 DNA Ligase基因的大肠杆菌经诱导表达后分离纯化而来的,催化相邻DNA链的5’磷酸基团和3’羟基基团以磷酸二酯键结合反应。该酶可催化平末端或粘性末端DNA之间的连接,还可修复双链DNA、RNA、DNA/RNA杂交双链中的单链切口。本制品可应用于DNA插入片段和载体DNA的粘性末端和平末端的连接,以及线性DNA的自身环化。




组分100U500U
T4 DNA Ligase(5U/μL)20μL100μL
10×Ligation Buffer150μL750μL
50% PEG Solution150μL750μL

保存:-20℃


  • T4 DNA Ligase的最终用量不要超过推荐的用量,否则影响连接效率。
  • PEG可以极大提高平末端的连接效率,我们推荐加入终浓度为5% PEG Solution以提高平末端的连接效率。
  • 为了提高转化效率,建议所加入连接产物的量不要超过感受态细胞体积的10%。
  • 由于T4 DNA Ligase中含有甘油,比较粘稠容易挂壁,建议使用之前短暂离心将液体收集到管底,取样时枪头尽量不要深入液面太深以免粘在枪头上造成损失。



  • 粘性末端的连接:
    • 按以下体系配制反应液:
      成分用量终浓度
      线性载体DNAX μL20~100ng
      插入DNA片段Y μL插入片段:载体1:1~5:1
      10×Ligation Buffer2μL
      T4 DNA Ligase(5U/μL)0.2μL1U
      ddH2O至20μL
    • 涡旋震荡,瞬间离心,将管壁上的溶液收集到管底。
    • 反应条件:22℃孵育10分钟。
    • 瞬间离心,将管壁上的溶液收集到管底,65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟以灭活T4 DNA Ligase。
    • 可取5μL连接产物热击转化50μL感受态细胞或取1~2μL连接产物电击转化50μL感受态细胞。
      注意:如需电击转化,推荐用乙醇沉淀法去除T4 DNA Ligase后进行电击转化。
  • 平末端的连接:
    • 反应体系:
      成分用量终浓度
      线性载体DNAX μL20~100ng
      插入DNA片段Y μL插入片段:载体1:1~5:1
      10×Ligation Buffer2μL-
      T4 DNA Ligase(5U/μL)1μL5U
      50% PEG Solution2μL5%
      ddH2O至20μL-
    • 涡旋震荡,瞬间离心,将管壁上的溶液收集到管底。
    • 反应条件:22℃孵育1小时。
    • 瞬间离心,将管壁上的溶液收集到管底,65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟以灭活T4 DNA Ligase。
    • 可取5μL连接产物热击转化50μL感受态细胞或取1~2μL连接产物电击转化50μL感受态细胞。
      注意:如需电击转化,推荐用乙醇沉淀法去除T4 DNA Ligase后进行电击转化。
  • 线性DNA的自身环化:
    • 反应体系:
      成分用量终浓度
      线性载体DNAX μL5~50ng
      10×Ligation Buffer5μL-
      T4 DNA Ligase(5U/μL)1μL5U
      ddH2O至50μL-
    • 涡旋震荡,瞬间离心,将管壁上的溶液收集到管底。
    • 反应条件:粘性末端22℃孵育10分钟;平末端22℃孵育1小时。
    • 瞬间离心,将管壁上的溶液收集到管底,65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟以灭活T4 DNA Ligase。
    • 可取5μL连接产物热击转化50μL感受态细胞或取1~2μL连接产物电击转化50μL感受态细胞。
      注意:如需电击转化,推荐用乙醇沉淀法去除T4 DNA Ligase后进行电击转化。

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