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耐热反转录酶4.0图片
产品货号:
SY0893
中文名称:
耐热反转录酶4.0
英文名称:
Histan IV Reverse Transcriptase
产品规格:
10kU|50kU
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
Histan IV Reverse Transcriptase是通过基因工程技术得到的全新逆转录酶,热稳定性大幅度提高,可耐受60℃,适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时,该酶增强了与模板的亲和力,适合低拷贝基因的逆转录和mRNA文库构建。Histan IV Reverse Transcriptase合成全长cDNA的能力也有了提升,可扩增长达10kb的cDNA。广泛应用于全长cDNA文库构建;终点法PCR;实时定量PCR等领域。


组分10kU50kU
Histan IV Reverse Transcriptase(200U/μL)50μL250μL
5×Histan IV Buffer250μL1.2mL

保存:-20℃,有效期1年。


以Poly(A)·Oligo(dT)为模板-引物,在37℃,10min内,将1nmol的dTTP掺入为酸不溶性物质所需要的酶量定义为1个活性单位。


  • 请保持实验区域洁净,操作时需穿戴干净的手套、口罩,实验所用耗材均需保证RNase free,以防止RNase污染;
  • 所有操作均应在冰上进行,防止发生RNA降解;
  • 为保证逆转录成功,建议使用高质量的RNA样本;
  • 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
  • 本产品仅作科研用途!



一、第一链cDNA合成操作步骤
  • RNA变性
    此步为可选步骤,RNA变性有助于打开二级结构,可在很大程度上提高第一链cDNA的产量。
    • 按下表加入各成分配制RNA变性反应体系
      成分用量
      引物Oligo (dT)18 (50μM)1μL
      Random Primers (50μM)1μL
      Gene Specific Primers(2μM)1μL
      模板RNATotal RNA10pg~5μg
      mRNA1pg~500ng
      RNase-free ddH2O至13μL

    • 65℃加热5min,迅速置于冰上冷却2min。
    • 简短离心收集反应液后加入下表中的逆转录反应液,并用移液器轻轻吹打混匀。
  • 配制逆转录反应液
    成分用量
    上一步的反应液13μL
    5×Histan IV Buffer4μL
    dNTP Mix(10mM)1μL
    Histan IV Reverse Transcriptase(200U/μL)1μL
    RNase Inhibitor(40U/μL)1μL

  • 设置逆转录程序
    温度时间
    25℃5min
    50℃15min
    85℃5min

    注:
    • 当使用Random Primers时,需25℃,孵育5min;若使用Oligo (dT)18或Gene Specific Primers,此步可省略;
    • 逆转录温度:推荐使用50℃。对于高GC含量模板或者复杂模板,可将逆转录温度提高到55℃~60℃;
  • 85℃加热5分钟,失活逆转录酶。
  • 逆转录产物可立即用于后续PCR或qPCR反应,也可-20℃短期保存,若需长期保存,建议分装后,于-80℃保存,避免反复冻融。

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