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本制品为虾来源的碱性磷酸酶，可以降解几乎所有磷酸单酯，但是该酶不能水解磷酸二酯或磷酸三酯。该酶作用于末端去磷酸化，无论末端为粘端，还是平端。SAP也可以用来降解PCR反应中的dNTP，用于后续测序和SNP分析。

碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase)可将DNA、RNA的5’端磷酸基团去除，常用于阻止载体的自连作用：在分子克隆实验中，DNA连接酶催化DNA连接时需要有磷酸基团的存在，载体在经酶切后会在切点端保留一个磷酸基团。而载体经碱性磷酸酶去磷酸化后因5’端无磷酸基团，因而不可以和自身3’端连接。因此连接反应中载体本身会优先发生的连接反应被阻止，提高了目的片段插入率。另外，碱性磷酸酶还可制备用于5’端标记的DNA模板。


来自毕赤酵母，克隆有北极虾(Pandalus rorealis)的虾碱性磷酸酶基因。


在25℃条件下，30分钟能使1μg经HindⅢ(产生5’突出末端)消化的pUC19 DNA去磷酸化所需的酶量定位为1个活力单位。

组分	规格
Shrimp Alkaline Phosphatase(1U/μL)	250μL
10×SAP buffer	1mL

保存：-20℃，有效期3年。


1×SAP Buffer，25℃温育。


65℃加热5分钟，活性完全不可逆丧失。当完成去磷酸化反应后，无需纯化产物，可以直接用于后续连接反应。


1×SAP Buffer：
50mM Bis-Tris HCl (pH6.0)，1mM MgCl₂，0.1mM ZnCl2。


纯度大于95%，无核糖核酸酶、脱氧核糖核酸酶污染。


一、DNA去磷酸化

• 在EP管中加入下列试剂：
  

  成分	用量
  DNA片段	1pmol
  10×SAP buffer	2μL
  Shrimp Alkaline Phosphatase (1U/μL)	1μL
  无菌ddH2O	Up to 20μL

  
  注：
  ① 可根据比例相应放大反应体系。
  ② 1pmol DNA片段量约相当于1μg 3kb大小的质粒。
  
• 混匀上述试剂，于25℃孵育30min。
  
• 将EP管65℃，5min温浴，终止反应。

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