产品货号：
MT0120
中文名称：
耐热反转录酶
英文名称：
ThermoStable Reverse Transcriptase
产品规格：
20kU
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本反转录酶是在鼠源病毒反转录酶基础上进行定点突变改良而得。该酶去除了RNase H活性中，从而避免反转录过程中降解RNA。同时经过突变文库筛选，使得其热稳定性更强（最佳活性温度55℃），耐热反转录酶在65℃条件下仍然有部分活性。相比于低温条件下反转录反应，采用高温反转录可显著打开RNA二级结构，从而提高复杂RNA模板的扩增性能、提高反转录cDNA的长度和产量，从而提高后续检测的灵敏度。
单位定义
以poly(rA)为模板、oligo(dT)为引物，在37℃条件下，10分钟内催化1nmol的dTTP掺入形成酸不溶性沉淀物所需要的酶量，定义为一个活性单位。
| 组分 | 规格 |
| ThermoStable RTase(200U/μL) | 100μL |
| 10×RT Buffer | 400μL |
保存：-20℃，有效期1年。
10mM Tris-HCl(pH7.5)，150mM NaCl，2mM DTT，0.1mM EDTA，0.02% Tween20，15%海藻糖。
- 本制品可在-20℃稳定保存1年，-80℃可保存3年，短期使用于4℃保存（1个月）。该制品反复冻融10次，不影响性能。
- 本制品可与Taq DNA聚合酶组合，用于One-Step RT-PCR，推荐的RT温度为55～60℃，RT时间为5min，在反应体系中酶的终浓度0.5～2U/μL。
- 按下表加入各成分配制反转录反应体系：
成分 用量 ThermoStable RTase(200U/μL) 1μL 10×RT Buffer 2μL dNTP Mixture (10mM each) 1μL Total RNA or Poly(A) RNA 0.1～2μg 20×Oligo dT(25)&Random Primer 1μL RNase inhibitor (40U/μL) 0.2μL RNase-Free H2O 至20μL - Oligo dT(25)使用浓度为20～50μM，如使用Random9随机引物可使用125μM，基因特异性引物可使用5μM。
- 在PCR仪上按以下程序进行反转录反应
温度 时间 30℃ 5min 37～65℃ 15～30min 85℃ 5min - 推荐的反转录温度设置为55℃，无论是高GC或长片段模板，均可获得综合性的cDNA产量。
- 反转录所得的cDNA可直接用于PCR反应或储存于-20℃。
图1.以人类RNA为模板，应用耐热反转录酶和M-MuLV反转录酶分别在50℃、55℃、60℃和65℃进行反转录反应，反应时间为15min，然后进行PCR扩增获得542bp的片段
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