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本制品为来源于E.coli uracil N-glycosylase基因的重组表达蛋白，分子量为26kDa。它可催化含尿嘧啶的单链和双链DNA释放游离尿嘧啶，但对RNA无活性。UNG主要应用于PCR扩增产物的防污染，作用原理基为：如果在PCR反应中以dUTP替代dTTP掺入DNA中，形成了含dU碱基的PCR扩增产物，该酶能选择性断裂单链和双链DNA中U基的糖苷键，降解该PCR扩增产物。

• 去除单链或双链DNA中的尿嘧啶碱基。
  
• 去除PCR残存污染。

在标准PCR反应体系下，37℃条件下，1小时降解1μg含dU碱基的单链DNA的酶量为一个活性单位。

组分	1000U	5000U
Uracil N-Glycosylase(5U/μL)	200μL	1mL
说明书	1份	1份

保存：-20℃，避免反复冻融，有效期2年。


20mM Tris-HCl，50mM NaCl，1mM DTT，50% Glycerol，0.1% (w/v) Triton X-100，pH7.5。


Uracil DNA Glycosylase (UNG)与绝大多数的PCR聚合酶反应缓冲液都是兼容的，但在高离子浓度(>100mM)下活性会受到抑制。


95℃加热5分钟。



取1μg dUTP PCR产物，用UNG 37℃消化30min后进行琼脂糖凝胶电泳。
泳道1：对照（不加UNG酶）；
泳道2-7：分别为2U、0.5U、0.125U、0.032U、0.008U、0.002U UNG酶37℃消化30min后的PCR产物；
M：DNA Marker 2000



UNG在标准PCR体系下（50μL体系）性能测试。处理方法为：在反应体系中分别加入不同量的UNG（如图所示），50度2min，95度5min，然后进入PCR循环扩增，扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳。
泳道1-3：标准dNTP Mixture，UNG用量0.25U/0.5U/1U；
泳道4-6：dNTP/dUTP Mixture，UNG用量0.25U/0.5U/1U；
M：DNA Marker 10000

• 配制反应体系
  

  成分	用量
  Strong Taq DNA Polymerase	0.5μL
  dNTP/dUTP Mixture	2～4μL
  10×Hi PCR Buffer	5μL
  Uracil N-Glycosylase(5U/μl)	0.2～0.5μL
  Primers (10μM each)	1μL
  Template DNA	10ng～1μg
  DEPC-treated Water	至50μL

  
  
• PCR循环参数设置
  

  循环数/过程	温度	时间
  去污染	50℃	2min
  热失活	95℃	5min
  30～40	95℃	20s
  	50～60℃	20s
  	72℃	1kb/min
  Last Cycle	72℃	5min

Strong Taq DNA Polymerase(货号：MT0022)
dNTP/dUTP Mixture(货号：MT0112)
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