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SUMO蛋白酶也称为UIP蛋白酶，是一种具有较高活性的半胱氨酸蛋白酶，来源于酵母编码的MIP1基因，其特异性识别UBL蛋白的三级结构－SUMO（Small Ubiquitin-Like Modifier）。SUMO蛋白酶能够识别完整的SUMO序列，并依赖正确的蛋白质构象，仅有完整的序列，没有正确的结构，SUMO酶是不能对目标蛋白进行切割的。因此，该酶是目前切割特异性最好的蛋白酶，可在较广泛的作用温度和PH范围（pH7～9）内发挥作用，切割的最佳温度为30℃。

本公司生产的SUMO蛋白酶含有双His标签，酶切后，可通过Ni-NTA Resin亲和纯化，很容易地将SUMO去除。双His标签保证了，SUMO蛋白酶高亲和力的结合Ni-NTA，以最大限度的去除SUMO蛋白酶。该SUMO蛋白酶分子量约26kD，比活>10⁵/mg。

SUMO蛋白酶的识别序列如下，切割位点位于QIGG之后
SDSEVNQEAKPEVKPEVKPETHINLKVSDGSSEIFFKIKKTTPLRRLMEAFAKRQGKEMDSLRFLYDGIRIQADQTPEDLDMEDNDIIEAHREQIGG


自E.coli表达经亲和纯化的重组蛋白酶。


在1×SUMO Buffer中，30℃反应1h，剪切>85％的2μg对照底物所需要的酶量定义为一个活性单位。

组分	规格
SUMO蛋白酶(10U/μL)	100μL
10×SUMO Buffer	1mL×3
3M NaCl	1mL

保存：-20℃，避免反复冻融，有效期6个月。


为达到最好的酶切效果，请保证重组蛋白为部分或完全纯化的蛋白。
可根据实际情况在0～300mM之间调节NaCl的浓度以达到最佳的效果。

• 在EP管中配制如下反应体系
  

  成分	用量
  融合蛋白	20μg
  10×SUMO Buffer	20μL
  SUMO蛋白酶(10U/μL)	1～5μL
  ddH2O	至200μL

• 混匀上述体系后于30℃孵育，在1、2、4、6小时分别吸出30μL上述反应液，置于单独的EP管中。
  注：若蛋白为热不稳定性，请在4℃孵育较长时间或增加酶的用量。
  
• 向上述EP管中加入20μL 2×SDS Loading Buffer，置于-20℃。
  
• 取30μL样品进行SDA-PAGE分析。

图1．分别用2μL和5μL的SUMO蛋白酶对100μg SUMO蛋白酶对照底物(货号：MT2631)进行酶切1h或3h，如图所示。 M：Protein Marker； 泳道1：纯化后的SUMO-A蛋白； 泳道2：2μL SUMO Protease酶切1h产物； 泳道3：5μL SUMO Protease酶切1h产物； 泳道4：2μL SUMO Protease酶切3h产物； 泳道5：5μL SUMO Protease酶切3h产物。

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