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PBCV DNA连接酶能够高效催化相邻的DNA核苷酸的连接，这个连接过程需要一条互补的RNA在两条DNA单链间起“夹板”或“桥梁”的固定作用。PBCV DNA连接酶的这种活性远远优于传统的T4 DNA连接酶，有助于miRNAs和mRNAs，包括SNPs在内的研究方法的创新。另外，在二代测序和分子诊断等众多领域中，PBCV DNA连接酶是富集目的基因的理想选择。它具有稳定的生物活性，对RNA介导固定的DNA底物亲和性强（米氏常数Km=1nM），能够在复杂的混合物中检测到亚纳摩尔级的特定RNA。因此，在RNA检测技术中，PBCV DNA连接酶不失为最佳选择用酶。

• 单链DNA的连接。
  
• 基于探针法的miRNA的检测。
  
• SNP或剪接体的检测。
  
• RASL分析。

• 该酶对ATP的要求比较宽泛，10～100μM ATP范围内都可发挥活性，5mM Mg²⁺可显著增加连接产物的量，最佳ph为7.5～8.0。
  
• 该酶对一价阳离子非常敏感，如NaCl或KCl的浓度应低于50mM，100mM的NaCl会完全抑制连接反应。
  
• 该酶的反应温度为16～37℃，随着温度的上升酶活性会提高，但此时腺苷化产物也随之增加，最佳温度为25℃。
  
• 连接效率随着夹板RNA长度的减少而降低，当长度小于等于10nt时，连接效率为零。
  
• 供体的5’端第一个碱基为“A/T”时连接效率最高。
  
• 受体的3’端第一个碱基为“T”时连接效率最高，3’端第一个碱基为“G”时连接效率最差。

• 底物和夹板退火
  建议反应体系中底物浓度在50nM～2μM之间，体系中酶的浓度低于1μM（该PBCV DNA连接酶为10μM）。在连接反应中，酶的浓度可设为底物浓度的2～3倍。将等摩尔浓度的底物混合均匀，75℃ 2分钟后缓慢降温至室温。
  
• 连接反应
  

  成分	用量
  退火后产物（1μM）	2μL
  10×PBCV Ligation Buffer	2μL
  PBCV DNA Ligase	1μL
  灭菌水	至20μL

• 25℃反应15～60分钟。
  
• 65℃加热20分钟，使酶失活。