产品目录

保存：-20℃

规格：200U/1000U
保存条件：-20度保存，有效期2年。
产品简介：
DNase I是一种需二价阳离子的脱氧核糖核酸内切酶，可用于降解单链或双链DNA。其原理为DNaseⅠ水解磷酸二酯键产生带有5'-磷酸基团和3'-OH的单核苷酸或寡核苷酸。Mg²⁺或Mn2+都可以激活DNase I的活性，而Ca2+浓度直接影响酶的活性。Mg²⁺存在时可在双链DNA的每条单链上随机地产生切口；而在Mn2+存在下可使双链DNA断裂，使DNA片段化。用于无DNA污染的RNA的制备，逆转录及体外转录等实验。
酶贮存液：50mM Tris-HCl,pH7.5 (25℃)；10mM CaCl2；50% Glycerol。
10×DNase I Buffer：100mM Tris-HCl,pH7.5 (25℃)；25mM MgCl₂；1mM CaCl2。
组分说明：
使用说明一：用于总RNA中基因组DNA的去除
1.以制备用于RT-PCR的RNA样品为例，配制10μL反应体系为例，如下表：
2． 37℃孵育5～10分钟。
3．加入1μL 50mM EDTA，65℃孵育10分钟，使DNaseⅠ失活，终止反应。
4．经过纯化得到纯品RNA(纯化方法见附加资料)。
使用说明二：用于RNA试剂盒(吸附柱法)提取过程中的基因组DNA的去除
1.准备DNase I工作液(每个吸附柱需要50μL的工作液)。
工作液配置方法：10μL 10×Reation Buffer(with MgCl₂)+2μL DNaseⅠ(RNase-Free)+88μL DEPC水。
2.RNA试剂盒操作步骤选取。常规的RNA提取过程为裂解—纯化—上柱—洗涤—洗脱。请在洗涤的前一步插入DNA去除步骤。
3.在未经洗涤的含RNA和基因组DNA的吸附柱中，加入50μL的DNase I工作液，37℃孵育5～10min。
4.12,000rmp/min离心1min。然后在穿透液中加入500～700μL的去蛋白液或者是洗涤液，混匀后，重新加入此吸附柱中。静置2min。
5.接后续洗涤洗脱步骤。
附加资料：RNA纯化方法
方法一：酚氯仿纯化
1.将需要纯化的RNA样品，DEPC水补足到100μL。
2．加入100μL的水饱和酚-氯仿-异戊醇(25:24:1)混合液，震荡混匀。
3． 12,000rmp/min离心1min。取上清加入50μL的氯仿-异戊醇混合液，震荡混匀。
4.12,000rmp/min离心1min。取上清。
5.加入10μL的3M乙酸钠，250μL预冷乙醇，冰上放置10min。
6.4℃，12,000rmp/min离心15min，弃上清。
7.加入70%预冷乙醇洗涤管壁，4℃，12,000rmp/min离心15min，弃上清。
8.沉淀干燥。
9.DEPC水溶解沉淀。
方法二：吸附柱纯化
1.将需要纯化的RNA样品，加入等体积的异丙醇颠倒混匀。
2．将上述样品加入到吸附柱中间，室温静置2min。
3． 12,000rmp/min离心1min。
4．在吸附柱中加入200μL的75%的乙醇，12,000rmp/min离心1min，弃穿透液。
5.将吸附柱空甩30s。
6.在吸附柱中间加入50μL的DEPC水，室温静置3min(需要将套管换成RNase-free的离心管)。
7.12,000rmp/min离心1min，穿透液即为RNA。
注意事项
1.因为DNase I经常用于需要保持RNA完整性的DNA消化实验，所以在酶制备过程中最大限度的避免了RNase污染，可以安全地用于RNA的提取，该酶中含RNase抑制剂，无需补加。
2.DNase I受剪切力的影响比较大，使用前可以将离心管上下颠倒混匀，避免涡旋震荡。
3.每处理1μg RNA，DNase I用量不要超过1U。
相关搜索：DNase I溶液(1kU/mL, RNase-Free)，DNase I Solution