产品货号：
JN5141
中文名称：
单链DNA/RNA环化酶II
英文名称：
ssDNA/ssRNA Circleligase II
产品规格：
10T
发货周期：
1～3天
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单链DNA/RNA环化酶II是一种热稳定性酶，可以在没有互补序列存在的情况下催化具有5'-磷酸基团和3'-羟基基团的单链DNA（ssDNA）/单链RNA (ssRNA)的自环化，该反应不依赖于ATP。
- 产生环状的单链DNA分子，用于滚环复制或者滚环转录的实验研究。
- 用于cfDNA/ctDNA测序，甲基化测序等。
- 可在标准反应条件下，高效催化长度为15～200nt的ssDNA/ssRNA发生链内环化；
- 可催化单链底物与5'磷酸化/腺苷酸化的单链DNA接头连接。
| 组分 | 规格 |
| Circleligase II(100U/μL) | 10μL |
| 5×Circleligase II Reaction Buffer | 100μL |
| 50mM Mncl2 | 20μL |
| ssDNA Control oligo(5pmol/μL) | 5μL |
| RNase-free water | 500μL |
保存：-20℃，有效期1年。
所有组分经检测均无大肠杆菌DNA残留，无核酸内/外切酶、磷酸酶以及RNA酶活性污染。
60℃条件下，1小时内催化1pmol的标准线性单链寡核苷酸（70nt，5'磷酸化）转换成抗核酸外切酶I消化的环状结构所需要的酶量定义为1个活性单位。
- 配制常用环化反应体系：
成分 用量 Circleligase II(100U/μL) 1μL 5×Circleligase II Reaction Buffer 4μL 50mM Mncl2 1μL ssDNA 1～10pmol RNase-free water 至20μL - ssDNA (15～200nt环化效率较高)应含有5'-磷酸基团和3'-羟基基团；
- 若实验有特殊需要，可缩短反应时间至30min，若为复杂模板，反应时间应适量延长或增加酶量。
- ssDNA (15～200nt环化效率较高)应含有5'-磷酸基团和3'-羟基基团；
- 反应条件： 1×反应缓冲液条件下，60℃温育1h。
- 热失活： 80℃加热10分钟。
- 连接产物经20%聚丙烯酰胺/8M尿素的PAGE胶检测，线性DNA分子的迁移速度较环状DNA分子快。
- 加入核酸外切酶I (Exo I)，37℃反应45min，线性DNA被完全消化，而环状单链DNA分子不受外切酶的影响。Exonuclease I，能够从ssDNA的3'-OH末端分解生成5'-单核苷酸，对ss DNA具有较高的特异性，不分解双链DNA及RNA。
图1．Circleligase II连接结果检测（变性PAGE胶）
lane1:未经Circleligase II和外切酶处理的70nt线性单链DNA；
lane2:Circleligase II处理后的70nt单链DNA环化产物；
lane3:70nt线性单链DNA环化产物经Exo I酶切处理结果。
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