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DNase I是一种可以将单链或双链DNA同等程度进行随机分解，生成具有5'-P末端寡核苷酸的脱氧核糖核酸内切酶。DNase I水解单链或双链DNA，其活性非常依赖于Ca²⁺水平，并能被Mg²⁺或Mn2+激活。Mg²⁺存在条件下，DNase I可随机剪切双链DNA的任意位点；Mn2+存在条件下，DNase I能在大约相同的位点剪切DNA的两条链，从而得到带有平末端或1～2个核苷酸突出的粘末端。

• 制备不含DNA的RNA样品；
  
• RT-PCR反应前RNA样品中，去除基因组DNA等可能的DNA污染；
  
• 体外T7，T3，SP6等RNA聚合酶催化的体外转录后去除DNA模板；
  
• 用于足迹法分析DNA-蛋白质相互作用；
  
• 与DNA聚合酶I一起用于切口平移；
  
• 二价锰离子存在条件下，使DNA片段化，产生DNA随机片段文库；
  
• 细胞凋亡TUNEL检测中部分剪切基因组DNA作为阳性对照。

• 热失活：加入终浓度为2.5mM的EDTA，65℃加热10min，即可失活。
  
• 使用时将酶置于冰上操作，使用完毕后-20℃保存。
  
• 金属离子螯合剂，0.1%SDS，DTT，巯基乙醇等对酶有抑制作用。

• 去除RNA样品中污染的基因组DNA：
  
  • 试剂溶化后，在冰上配制如下反应体系：
    

    成分	用量
    模板RNA	1μg
    10×Reaction Buffer with MgSO4	1μL
    RNase-Free DNase I(1U/μL)	1μL
    RNase Inhibitor (40U/μL)	0.5～1μL (可不加)
    RNase-Free Water	至10μL

  • 混匀后瞬时离心，37℃孵育30min。
    
  • 加入终浓度为2.5mM的EDTA，65℃加热10min终止反应。
• 体外转录后去除DNA模板：
  
  • 按照每微克DNA模板，加入2U DNase I，注意酶的用量可根据实际需要优化。
    
  • 37℃孵育15min。
    
  • 加入终浓度为2.5mM的EDTA，65℃加热10min终止反应。

• RNA在加热时容易降解，可用苯酚/氯仿抽提去除DNase，乙醇沉淀RNA。