产品货号：
JN5079
中文名称：
T7核酸内切酶I
英文名称：
T7 Endonuclease I
产品规格：
250U|1250U
发货周期：
1～3天
产品价格：
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T7 Endonuclease I识别并切割不完全配对DNA、十字型结构DNA、Holliday结构或交叉DNA、异源双链DNA或者以更慢的速度切割含切刻的双链DNA。该酶切割错配碱基5'端的第一、第二、或第三个磷酸二酯键。
- 基因突变和SNP的检测，可应用于TALEN、CRISPR/Cas9基因编辑形成的突变体检测；
- 识别错配DNA，分解四方向交叉DNA或分支DNA；
- 检测或切割异源二聚体DNA和切割DNA；
- 随机切割线性DNA进行shot-gun克隆。
| 组分 | 250U | 1250U |
| T7 Endonuclease I(10U/μL) | 25μL | 25μL×5 |
| 10×T7EI Reaction Buffer | 1mL | 1mL×5 |
| Control primer (10μM) | 20μL | 20μL×5 |
| Control template C (30ng/μL) | 10μL | 10μL×5 |
| Control template D (30ng/μL) | 10μL | 10μL×5 |
保存：-20℃
1单位指在50μL反应体系，37℃条件下，1小时将90%以上的1μg超螺旋十字型结构pUC(AT)*转化成线性DNA结构所需的酶量。
经多次柱纯化，SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带，纯度达90%，PCR方法检测无大肠杆菌DNA残留，无核酸内、外切酶污染。
T7核酸内切酶I是一种具有底物结构选择性的酶。该酶以不同的活性作用于不同的DNA底物。切割特定底物时，必须控制酶量和反应时间。反应温度超过42℃时，会增加非特异性核酸酶活性。避免反应温度超过55℃，会导致酶活性降低。
图1．T7E1法检测突变体
泳道1：野生型条带700bp；
泳道2：突变型条带700bp；
泳道3：野生型条带与突变型条带退火，产生T7EI切割条带300bp+400bp。
- 分别以突变体DNA和野生型DNA为模板，PCR扩增含突变位点的片段，片段长度约500bp，突变位点避免位于片段中间，便于区分切割后条带；
- 变性退火PCR产物：
成分 用量 10×T7EI Reaction Buffer 1μL PCR产物 0.3μg RNase-Free Water 至9μL 温度 时间 95℃ 5min 95℃～85℃ -2℃/sec 85℃～25℃ -0.1℃/sec 16℃ 2min - 酶切反应：
上一步反应液中加入0.5μL T7E1酶，37℃保温15～30min，立即加入DNA loading buffer终止反应，混匀后65℃保温10min，琼脂糖凝胶电泳检测酶切结果。
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