产品货号：
JN5077
中文名称：
Cas12a核酸酶
英文名称：
LbaCas12a Nuclease
产品规格：
50μg|500μg
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本制品源自Lachnospiraceae bacterium，在蛋白两端分别加了核定位信号（NLS），当Cas12a以NLS序列表达时，Cas12a-RNP复合体可以在进入细胞后立即定位到细胞核。无需体内转录或翻译，提高了该方法在质粒系统上的效率。另外，本制品还具有一种trans切割的活力，即一旦靶标dsDNA、crRNA和Cas12a蛋白形成三元复合体时，特异性切割靶标dsDNA的同时，会非特异切割体系中其他的ssDNA。这促使Cas12a可以作为一种新型的基因检测和成像的工具。
CRISPR相关蛋白Cas9已经广泛应用于基因组编辑，相比于Cas9蛋白，Cas12a具有类似的基因组编辑效率，但具有较低的脱靶效率，在基因治疗应用中具有巨大的潜力。
不同于Cas9蛋白，Cas12a不需要tracrRNA，只需要单个由41～44nt核苷酸组成的crRNA引导。与Cas9需要富含G的PAM相反，Cas12a-crRNA复合物通过识别富含T（5'-TTTN-3'）的PAM基序来切割靶DNA。Cas12a执行剪切后的DNA双链断裂引入了4或5个核苷酸突出的粘性末端。
- 基于蛋白与sgRNA转染的非病毒载体CRISPR基因敲除；
- 基于蛋白与sgRNA转染的非病毒载体CRISPR基因敲入；
- sgRNA剪切靶点DNA效率检测，降低体内筛选成本；
- 体外剪切靶DNA的特异位点。
- 纯蛋白体系，避免CRISPR基因敲除时引入质粒或病毒干扰；
- 可显著降低脱靶效应。
| 组分 | 50μg | 500μg |
| Cas12a Nuclease(2.5μg/μL) | 20μL | 200μL |
| 10×Cas12a-dsDNA Buffer I | 500μL | 1mL×5 |
| 10×Cas12a-ssDNA Buffer II | 500μL | 1mL×5 |
保存：-20℃
500mM NaCl，20mM sodium acetate，0.1mM EDTA，0.1mM TCEP，50% Glycerol，pH6.0。
经多次柱纯化，SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带，纯度达90%；内毒素含量<100EU/mg；qPCR方法检测无大肠杆菌基因组残留；无RNase、核酸内、外切酶污染。
图1．Cas12a Nuclease做DNA片段体外切割活性检测。
带有靶位点的DNA片段约为1500bp，酶切后的片段为1000bp和500bp。
- 体外切割靶标dsDNA
- 按下表加入各成分配制反应体系
注：在反应体系中可添加RNase Inhibitor至1U/μL，防止dsDNA不纯导致sgRNA的降解。成分 用量 10×Cas12a-dsDNA Buffer I 2μL 靶标dsDNA(200nM) 1μL sgRNA(15μM) 1μL LbaCas12a Nuclease 2～8pmol RNase-Free Water 至20μL - 37℃保温1h，70℃反应10min。
- 按下表加入各成分配制反应体系
- 体外切割探针ssDNA
- 按下表加入各成分配制反应体系
注：推荐Cas12a∶gRNA∶DNA的摩尔比为15∶10∶1这样可获得最佳的切割效率。成分 用量 10×Cas12a-ssDNA Buffer II 2μL 靶标dsDNA(35nM) 2μL sgRNA(350nM) 2μL 探针ssDNA(10μM) 0.5μL Cas12a Nuclease 1～4pmol - 37℃每30～60s收集一次荧光，80～99cycles。
- 按下表加入各成分配制反应体系
| 货号 | 名称 | 说明 |
| JN0065 | NLS-Cas9 Nuclease | |
| JN3003 | NLS-Cas9（D10A）Nickase | 在Cas9 Nuclease基础上突变其中一个切割活性中心，其能在sgRNA靶序所在的DNA链上产生切口，从而形成功能性的单链断裂。 |
| JN3009 | NLS-Cas9（H840A）Nickase | 在Cas9 Nuclease基础上突变其中一个切割活性中心，其能在sgRNA靶序互补的DNA链上产生切口，从而形成功能性的单链断裂。 |
| JN3005 | Cas9(D10A,H840A) Nuclease | 具有靶DNA结合活性，但无切割活性，可用于阴性对照等用途。 |
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