产品货号：
JN5049
中文名称：
BalbScript III反转录酶(无甘油)
英文名称：
BalbScript III Reverse Transcriptase(Glycerol-Free)
产品规格：
10kU|50kU
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本制品是对M-MuLV(RNase H-)进行基因工程改造，表达并纯化的高温逆转录酶，比M-MuLV（RNase H-）提高了热稳定性。该酶可以在高温条件下（50～60℃）进行cDNA第一链的合成，高温条件下有利于打开复杂RNA模板链。该酶最佳反应温度为50～55℃，具有热稳定相强，灵敏度高，特异性高，聚合能力强等优点。本制品不包含甘油等影响冻干工艺的成分，可用于冻干反应体系的配制和产品设计。
- 1st Strand cDNA的合成；
- cDNA Probe的制备；
- RT-PCR反应以及Real Time RT-PCR反应。
| 组分 | 10kU | 50kU |
| BalbScript III反转录酶(200U/μL) | 50μL | 250μL |
| 5×BalbScript III RT Buffer | 1mL | 2.5mL×2 |
保存：-20℃
以Poly(rA)·Oligo(dT)为模板/引物，在50℃、10分钟条件下，掺入1nmol的[3H] dTTP所需要的酶量定义为1个活性单位。
经多次柱纯化，SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一目的条带。PCR方法检测无大肠杆菌DNA残留，无核酸内、外切酶污染，无RNA酶污染。
- 用DEPC处理实验用到的所有实验器材，或者购买已经证明无核酸酶的实验用具，实验过程戴手套并经常更换手套，避免RNA酶的污染。
- 确保所用试剂及超纯水中无RNA酶污染。
- 在反转录过程中，所有管子确保扣严。
- 纯化过的RNA必须保证不含有盐，金属离子，乙醇和苯酚，以上成分会干扰第一链cDNA的合成反应。可采用乙醇沉淀RNA的方法去除掉痕量污染物。
- 为保证反转录反应的有效进行，需使用高质量的RNA模板。
第一链cDNA合成
试剂融化后，将试剂盒中各组分混匀并稍微离心后置于冰上。
- 按顺序加入以下反应物，轻轻混匀，离心：
成分 用量 模板RNA 总RNA 0.1ng～5μg poly(A) mRNA 10pg 特异性RNA 0.01pg 引物 Oligo(dT)18 (50μM) 1μL Random N6 (100μM) 1μL 基因特异性引物 15～20pmol 5×BalbScript III RT Buffer 4μL RNase Inhibitor(40U/μL) 1μL dNTPs(10mM) 1μL BalbScript III反转录酶(200U/μL) 1μL RNase-Free Water 至20μL - 可选优化步骤：如果RNA模板GC含量高或含有二级结构，可先将模板与引物的混合液轻轻混匀，短暂离心，65℃孵育5min，冰上冷却。
- 如果使用Oligo(dT)18或者基因特异性引物，50℃孵育15～30min。使用随机六聚体引物时，25℃先孵育5min，随后50℃孵育15～30min。对于高GC含量或者具有复杂二级结构的RNA模板，使用60℃孵育15～30min。
- 终止反应：75℃加热5min。
- 反应产物可直接用于PCR反应，如果不立即使用，-20℃保存少于一周的时间。长时间保存建议-70℃放置。
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