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NLS-Cas9(H840A)Nickase图片
产品货号:
JN3009
中文名称:
NLS-Cas9(H840A)Nickase
英文名称:
NLS-Cas9 H840A Nickase
产品规格:
50μg
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
本产品是spCas9 Nuclease的一个突变体。Cas9 Nuclease具有两个切割活性中心,从而实现在sgRNA靶序列特定位点引入DNA双链断裂(DSB)。NLS-Cas9(H840A)Nickase在Cas9 Nuclease基础上突变其中一个切割活性中心,其能在sgRNA靶序列所在的DNA链上产生切口,从而形成功能性的单链断裂,并且通过在蛋白两端加了核定位信号(NLS),可使蛋白进入细胞核内进行基因组编辑,配合一对gRNA使用,可实现Cas9 Nuclease相同的基因编辑效果,由于有效的识别序列由20bp增加至40bp,可明显减少意外的脱靶基因修饰,从而显著提高CRISPR/Cas9技术基因修饰的特异性。


CRISPR/Cas9是细菌和古细菌在长期演化过程中形成的一种适应性免疫防御系统,改造后的II型CRISPR/Cas9系统在基因的定点修饰中展现出巨大的应用潜能。脱靶效应是目前CRISPR/Cas9技术应用的一个难题,在基因编辑应用中,可能会出现难以预测的后果。


  • 纯蛋白体系,避免CRISPR基因敲除时引入质粒或病毒干扰;
  • 可显著降低脱靶效应。



  • 基于蛋白与sgRNA转染的非病毒载体CRISPR基因敲除;
  • 基于蛋白与sgRNA转染的非病毒载体CRISPR基因敲入;
  • sgRNA剪切靶点DNA效率检测,降低体内筛选成本;
  • 体外剪切靶DNA的特异位点。



NLS-Cas9(H840A) Nickase
图1.Cas9(H840A) Nickase DNA切割活性检测,50~100ng酶可有效切割cccDNA(95%)。
cccDNA:带有靶位点的超螺旋DNA;
ocDNA:酶切产生切刻后的开环DNA。


组分规格
NLS-Cas9(H840A)Nickase(0.1μg/μL)500μL
10×Reaction Buffer1mL

保存:-20℃


10mM Tris-HCl,300mM NaCl,0.1mM EDTA,50% Glycerol,PH7.4@25℃。


  • 经多次柱纯化,SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带,纯度达95%;
  • 内毒素含量<0.1 EU/μg;
  • qPCR方法检测无大肠杆菌基因组残留;
  • 无RNase、核酸内、外切酶污染。



  • 按下表加入各成分配制20μL体外切割体系:
    成分用量
    Supercoiled DNA200ng
    sgRNA200ng
    NLS-Cas9(H840A)Nickase50~100ng
    10×Reaction Buffer2μL
    RNase-Free Water至20μL

    注:在反应体系中可添加RNase Inhibitor至1U/μL,防止RNase污染。
  • 37℃反应1小时。
  • 70℃加热10分钟。



货号名称说明
JN0065NLS-Cas9 Nuclease
JN3003Cas9 D10A Nickase能在与sgRNA靶序列互补的DNA链上产生切口,从而形成功能性的单链断裂,可以减少意外的脱靶基因修饰。
JN3004Cas9 H840A Nickase能在与sgRNA靶序列非互补的DNA链上产生切口,从而形成功能性的单链断裂,可以减少意外的脱靶基因修饰。
JN3005Cas9(D10A,H840A)Nuclease为Cas9 D10A和H840A双突变失活酶,具有靶DNA结合活性,但无切割活性,可用于阴性对照等用途。

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