产品货号：
GS5126
中文名称：
AfIII限制性内切酶
英文名称：
SwiftCut AfIII Restriction Endonuclease
产品规格：
100T
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
简要说明：
酶切位点：
酶活定义：
37℃条件下，在20μL通用SwiftOne反应体系中，1μL酶能够在15min内完全消化1μg pEPE DNA所需的AfIII酶量。
产品组成：
保存：-20℃，有效期1年。
质量控制：
注意事项：
使用方法：
附录参考：
常见DNA中AfIII酶切识别位点数：
双酶切或多酶切：
相关搜索：AfIII限制性内切酶，AfIII内切酶，AfIII限制酶，，SwiftCut AfIII Restriction Endonuclease
SwiftCut系列限制性内切酶是一系列能够在5～15分钟之内快速剪切DNA的快速酶。所有SwiftCut限制酶都适用于通用的SwiftOne缓冲液，可在统一反应体系内任意组合，无需多次单酶切或更换酶切缓冲液。SwiftCut系列限制性内切酶经过多个严格的质控环节，适用于质粒DNA、PCR产物或基因组DNA等的快速酶切。
酶切位点：
5'…C↓T T A A G…3'
3'…G A A T T↑C…5'
3'…G A A T T↑C…5'
酶活定义：
37℃条件下，在20μL通用SwiftOne反应体系中，1μL酶能够在15min内完全消化1μg pEPE DNA所需的AfIII酶量。
产品组成：
| 组分 | 规格 |
| SwiftCut AfIII内切酶 | 100μL |
| 10×SwiftOne缓冲液 | 1mL |
保存：-20℃，有效期1年。
质量控制：
- 超长时间孵育/星号活性检测：37℃下，在20μL反应体系中，将1μL SwiftCut AfIII与1μg pEPE DNA共同温育3h，未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解。但长时间孵育可能出现星号活性。
- 酶切-连接-再酶切检测：37℃下，使用10倍酶量消化底物，回收酶切产物。在22℃下使用适量T4 DNA连接酶可以将超过95%的酶切产物重新连接。将连接产物再次回收后，使用相同的内切酶可以重新切开超过95%的连接产物。
注意事项：
- DNA甲基化对AfIII酶切的影响：
Dam Dcm CpG EcoKI EcoBI 不影响 不影响 不影响 不影响 不影响 - AfIII的同裂酶：BspTI、BfrI、BstAFI、MspCI、Vha464I。
- 热失活：在80℃加热20min使AfIII酶失去活性。
- 本制品专为研究而设计，仅在体外使用。不适用于人或动物诊断等体内实验。
使用方法：
- 在冰上依次加样配制反应体系：
成分 质粒DNA PCR产物 基因组DNA ddH2O 15μL 16μL 30μL 10×SwiftOne缓冲液 2μL 3μL 5μL 底物DNA 2μL(up to 1μg) 10μL(约0.2μg) 10μL(5μg) SwiftCut MscI内切酶 1μL 1μL 5μL 总体积 20μL 30μL 50μL - 以上PCR产物体系适用于经过纯化的PCR产物酶切，未纯化的PCR产物具备一定的离子强度，10×SwiftOne缓冲液加入量可适当减少至2μL，但由于DNA聚合酶同时具有外切酶活性，会影响酶切产物，因此如下一步需进行克隆等操作，建议酶切前对PCR产物进行纯化。
- 质粒底物可等比例放大反应体系，如果总反应体系大于20μL，应适当增加温育时间，尽量使用水浴、金属浴或沙浴。
- 以上PCR产物体系适用于经过纯化的PCR产物酶切，未纯化的PCR产物具备一定的离子强度，10×SwiftOne缓冲液加入量可适当减少至2μL，但由于DNA聚合酶同时具有外切酶活性，会影响酶切产物，因此如下一步需进行克隆等操作，建议酶切前对PCR产物进行纯化。
- 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀(切勿涡旋)，然后瞬时离心以收集挂壁液滴。
- 37℃孵育15min(质粒)，或15～30min(PCR产物)，或30～60min(基因组DNA)。
- 80℃温育20分钟即可酶失活，停止反应(可选)。
附录参考：
常见DNA中AfIII酶切识别位点数：
| λDNA | φX174 | M13mp18/19 | pBR322 | pUC57 | SV40 | Adeno2 | pUC18/19 |
| 3 | 2 | 0 | 0 | 0 | 1 | 4 | 0 |
双酶切或多酶切：
- 每种酶的用量为1μL，并根据需要适当扩大反应体系；
- 所有酶的体积总和不得超过总反应体系的1/10；
- 若所选用内切酶的最适反应温度不同，应先以最适温度较低的酶开始酶切，再添加最适温度较高的酶，以较高的温度进行孵育。
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