产品货号：
GS5119
中文名称：
KpnI限制性内切酶
英文名称：
SwiftCut KpnI Restriction Endonuclease
产品规格：
200T
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
简要说明：
酶切位点：
酶活定义：
37℃条件下，在20μL反应体系中，1μL酶能够在15min内完全消化1μg λDNA所需的KpnI酶量。
产品组成：
保存：-20℃，有效期1年。
质量控制：
注意事项：
使用方法：
附录参考：
常见DNA中KpnI酶切识别位点数：
双酶切或多酶切：
相关搜索：KpnI限制性内切酶，KpnI内切酶，KpnI限制酶，，SwiftCut KpnI Restriction Endonuclease
SwiftCut系列限制性内切酶是一系列能够在5～15分钟之内快速剪切DNA的快速酶。所有SwiftCut限制酶都适用于通用的SwiftOne缓冲液，可在统一反应体系内任意组合，无需多次单酶切或更换酶切缓冲液。SwiftCut系列限制性内切酶经过多个严格的质控环节，适用于质粒DNA、PCR产物或基因组DNA等的快速酶切。
酶切位点：
5'…G G T A C↓C…3'
3'…C↑C A T G G…5'
3'…C↑C A T G G…5'
酶活定义：
37℃条件下，在20μL反应体系中，1μL酶能够在15min内完全消化1μg λDNA所需的KpnI酶量。
产品组成：
| 组分 | 规格 |
| SwiftCut KpnI内切酶 | 200μL |
| 10×SwiftOne缓冲液 | 1mL |
保存：-20℃，有效期1年。
质量控制：
- 超长时间孵育/星号活性检测：37℃下，将1μL SwiftCut KpnⅠ与1μg λDNA共孵育3小时后，并未检测到由于其他核酸酶污染或星号活性而引起的底物非特异性降解。但更长时间的孵育可能出现星号活性。
- 酶切-连接-再酶切检测：37℃下，使用10倍酶量消化底物，回收酶切产物。在22℃下使用适量T4 DNA连接酶可以将超过95%的酶切产物重新连接。将连接产物再次回收后，使用相同的内切酶可以重新切开超过95%的连接产物。
- 非特异性内切酶活性检测：37℃下，20μL体系下，使用1μL酶量与1μg超螺旋DNA共同孵育4小时后，使用琼脂糖凝胶电泳检测，质粒DNA仍然处于超螺旋状态。
- 蓝/白斑克隆测定：将含有单一lacZ基因的载体以10倍酶量消化，重新连接后转化入大肠杆菌感受态细胞，涂布在含有对应抗生素、IPTG和X-gal的LB培养基平板上。连接正确的产物会生长出蓝色菌落，而连接错误(即DNA末端切口不完整)的产物将得到白色菌落。对于SwiftCut系列限制酶而言，白色菌落比例应小于1%。
注意事项：
- DNA甲基化对KpnI酶切的影响：
Dam Dcm CpG EcoKI EcoBI 不影响 不影响 不影响 不影响 不影响 - KpnI的同裂酶：Asp7181、Acc65I。
- 热失活：不可热失活，请使用酚氯仿抽提或柱纯化。
- 本制品专为研究而设计，仅在体外使用。不适用于人或动物诊断等体内实验。
使用方法：
- 在冰上依次加样配制反应体系：
成分 质粒DNA PCR产物 基因组DNA ddH2O 15μL 16μL 30μL 10×SwiftOne缓冲液 2μL 3μL 5μL 底物DNA 2μL(up to 1μg) 10μL(约0.2μg) 10μL(5μg) SwiftCut MscI内切酶 1μL 1μL 5μL 总体积 20μL 30μL 50μL - 以上PCR产物体系适用于经过纯化的PCR产物酶切，未纯化的PCR产物具备一定的离子强度，10×SwiftOne缓冲液加入量可适当减少至2μL，但由于DNA聚合酶同时具有外切酶活性，会影响酶切产物，因此如下一步需进行克隆等操作，建议酶切前对PCR产物进行纯化。
- 质粒底物可等比例放大反应体系，如果总反应体系大于20μL，应适当增加温育时间，尽量使用水浴、金属浴或沙浴。
- 以上PCR产物体系适用于经过纯化的PCR产物酶切，未纯化的PCR产物具备一定的离子强度，10×SwiftOne缓冲液加入量可适当减少至2μL，但由于DNA聚合酶同时具有外切酶活性，会影响酶切产物，因此如下一步需进行克隆等操作，建议酶切前对PCR产物进行纯化。
- 轻轻混匀并瞬甩几秒钟。
- 37℃孵育15min(质粒)，或15～30min(PCR产物)，或30～60min(基因组DNA)。
- 酚氯仿抽提或柱纯化(可选)。
附录参考：
常见DNA中KpnI酶切识别位点数：
| λDNA | φX174 | M13mp18/19 | pBR322 | pUC57 | pUC18/19 | SV40 | Adeno2 |
| 2 | 0 | 1 | 0 | 1 | 1 | 1 | 8 |
双酶切或多酶切：
- 每种酶的用量为1μL，并根据需要适当扩大反应体系；
- 所有酶的体积总和不得超过总反应体系的1/10；
- 若所选用内切酶的最适反应温度不同，应先以最适温度较低的酶开始酶切，再添加最适温度较高的酶，以较高的温度进行孵育。
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