产品货号：
GS2226
中文名称：
热敏型碱性磷酸酶
英文名称：
Thermolabile Alkaline Phosphatase
产品规格：
50U|200U|1000U
发货周期：
1～3天
产品价格：
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碱性磷酸酶催化DNA，RNA和核苷酸释放5'-和3'-磷酸基团，该酶还可去除蛋白中的磷酸基团。
一个酶活单位是在37℃，pH8.0，AP Buffer中每分钟催化1 μmol磷酸对硝基苯酯水解的量。
携带编码细菌AP基因质粒的大肠杆菌。
保存：-20℃
25mM Tris-HCl(pH8.0)，1mM MgCl2，0.1mM ZnCl2，0.1% Triton X-100和50%甘油。
10×AP Buffer：
500mM Tris-HCl(pH8.0@37℃)，100mM MgCl2，0.1mM ZnCl2，100mM KCl。
金属螯合剂
在75℃下加热5分钟失活。
相关搜索：热敏型碱性磷酸酶，热敏性磷酸酶，Thermolabile Alkaline Phosphatase
- 重组酶
- 快速去磷酸化
- 快速失活
- 载体DNA的同时酶切和去磷酸化
- 克隆载体DNA的脱磷酸化，以防止连接过程中的再循环；
- 载体DNA同时消化和去磷酸化；
- 在PCR产物测序之前的核苷酸降解；
- 在用T4多核苷酸激酶标记前，核酸5'-端的脱磷酸化；
- 其他DNA和RNA底物去磷酸化的应用；
- 蛋白质去磷酸化。
一个酶活单位是在37℃，pH8.0，AP Buffer中每分钟催化1 μmol磷酸对硝基苯酯水解的量。
携带编码细菌AP基因质粒的大肠杆菌。
| 组分 | 50U | 200U | 1000U |
| 热敏型碱性磷酸酶(0.2U/μL) | 250μL | 1mL | 5×1mL |
| 10×AP Buffer | 500μL | 1mL | 5mL |
保存：-20℃
25mM Tris-HCl(pH8.0)，1mM MgCl2，0.1mM ZnCl2，0.1% Triton X-100和50%甘油。
10×AP Buffer：
500mM Tris-HCl(pH8.0@37℃)，100mM MgCl2，0.1mM ZnCl2，100mM KCl。
金属螯合剂
在75℃下加热5分钟失活。
- 内切核糖核酸酶分析
10U AP与1μg pUC19 DNA在37℃下孵育4h后，未检测出共价闭合的环状DNA转化为有切口的DNA。 - 核糖核酸酶分析
10U AP与1μg 16S，23S rRNA在37℃孵育4h后，未检测出污染的RNA酶活性。
- 质粒载体线性化与去磷酸化同步反应流程
- 于冰上配制如下反应体系：
为了保证去磷酸化的效率，质粒DNA应不含RNA和基因组DNA污染。成分 用量 质粒DNA 1μg 10×酶切Buffer 5μL 限制性内切酶 1μL 碱性磷酸酶 5μL(1U) ddH2O 至50μL - 充分混匀并瞬离，37℃温育10～30min。
注：如果延长温育时间，可能产生星号活性。 - 80℃温育20min，以终止反应。
- 于冰上配制如下反应体系：
- 核苷酸去磷酸化的实验流程
该方案适用于去除DNA的3'和5'端磷酸基团。- 于冰上配制如下反应体系：
成分 用量 线性DNA 1μg 10×AP Buffer 5μL 碱性磷酸酶 5μL(1U) ddH2O 至50μL - 充分混匀并瞬离，37℃温育10min。
- 75℃温育5min，以终止反应。
- 于冰上配制如下反应体系：
- 蛋白质去磷酸基团的实验流程
- 于冰上配制如下反应体系：
成分 用量 10×AP Buffer 5μL 磷酸化蛋白质 2～4μg 碱性磷酸酶 10μL(2U) dd H2O 至50μL - 充分混匀并瞬离，37℃温育1h；
- 添加EDTA至50mM的终浓度，或添加钒酸钠(Na3VO4)至10mM的终浓度，以终止反应。
- 于冰上配制如下反应体系：
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