产品货号：
BM1001
中文名称：
快速碱性磷酸酶
英文名称：
Fast Alkaline Phosphatase
产品规格：
1000U
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本制品可催化DNA、RNA以及核苷酸5'端和3'端磷酸基团的水解，也能够去除蛋白磷酸基团，但不能催化磷酸二脂及磷酸三脂的水解。在37℃的条件下作用10分钟，该酶即可使所有类型DNA的末端去磷酸化。由于该酶在CutFlash酶切Buffer中具有100%活性，且失活条件为80℃温育20分钟，因此与LightiNing快速内切酶进行“酶切-去磷酸化”反应时，可在同管内完成，大大简化了实验流程。
37℃条件下，碱性磷酸酶(1U/μL)缓冲液环境中，10min内能够将1μg线性化pUC57 DNA的5'末端去磷酸化所需要的酶量定义为1个活性单位（U）。
| 组分 | 规格 |
| 碱性磷酸酶(1U/μL) | 1mL |
| 10×AP Buffer | 2×1mL |
保存：-20℃
- 核酸内切酶残留检测：将酶液与超螺旋质粒DNA在37℃温育4h，通过DNA电泳检测质粒无变化。
- 核酸外切酶残留检测：将酶液与双链DNA底物在37℃温育16h，通过DNA电泳检测双链DNA底物无变化。
- 宿主检测：将酶液中残留的核酸经E.coli 16S rDNA特异性的Taq Man qPCR检测，E.coli基因组残留低于10拷贝。
与碱性磷酸酶结合的DNA在琼脂糖凝胶中可能会出现条带偏移或弥散，为避免此现象，可在样品中加入混有SDS的6×Loading Buffer，先在80℃温育20min，冰浴降温后再进行电泳。
- 质粒载体线性化与去磷酸化同步反应流程
- 于冰上配制如下反应体系：
注：为了保证去磷酸化的效率，质粒DNA应不含RNA和基因组DNA污染。成分 用量 质粒DNA 1μg 10×CutFlash Buffer 2μL LightFlash限制性内切酶 1μL 碱性磷酸酶(1U/μL) 1U (1μL) ddH2O 至20μL - 充分混匀并瞬离，37℃温育15～30min。
注：如果延长温育时间，可能产生星号活性。 - 80℃温育20min，以终止反应。
- 于冰上配制如下反应体系：
- 核苷酸去磷酸化的实验流程
该方案适用于去除DNA的3'和5'端磷酸基团。- 于冰上配制如下反应体系：
成分 用量 线性DNA 1μg 10×AP Buffer 2μL 碱性磷酸酶(1U/μL) 1U (1μL) ddH2O 至20μL - 充分混匀并瞬离，37℃温育10min。
- 80℃温育20min，以终止反应。
- 于冰上配制如下反应体系：
- 蛋白质去磷酸基团的实验流程
以下为蛋白质去磷酸基团的反应体系和实验流程的举例，实验时请根据具体底物类型调整Alkaline Phosphatase的使用量以及最佳温育时间。- 于冰上配制如下反应体系：
成分 用量 10×AP Buffer 2μL 磷酸化蛋白质 2～4μg (终浓度0.1～0.2mg/mL) 碱性磷酸酶(1U/μL) 10U (10μL) ddH2O 至20μL - 充分混匀并瞬离，37℃温育1h；
- 添加EDTA至50mM的终浓度，或者添加钒酸钠（Na3VO4）至10mM的终浓度，以终止反应。
- 于冰上配制如下反应体系：
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