产品货号:
BM0313
中文名称:
核酸外切酶III
英文名称:
Exonuclease III
产品规格:
5000U
发货周期:
1~3天
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Exonuclease III是一种核酸外切酶,该酶作用于双链DNA,从3'-OH末端方向逐步切去单核苷酸。Exonuclease III也有RNase H、3'-磷酸酶和脱嘌呤/嘧啶-核酸内切酶活性。
该酶最适底物是平末端或5'末端突出的DNA,但也可以作用于双链DNA切刻位点产生单链缺口。由于对单链DNA无活性,因此该酶难以切割3'突出末端。3'到5'外切酶活性对底物的消化程度随3'突出末端的长度而变化,四碱基或更长的突出末端难以被切割。这种特性可以用于生产特定方向的单链DNA,将线性化DNA设计成为一端为不切割末端(3'突出端),另一端则设计为易切割末端(平端或5'突出端),此时Exonuclease III将仅消化一条链。
一个酶活单位(U)的定义是以双链DNA为底物在37℃下孵育30min,生成1nmol的酸可溶性物所需的酶量。
- 单向嵌套缺失。
- 定点突变。
- 单链特异性探针的制备。
- 双脱氧测序用单链底物的制备。
组分 | 规格 |
Exonuclease III(100U/μL) | 50μL |
10×Exo III Buffer | 500μL |
保存:-20℃
1×Exo III Buffer,37℃孵育。
核酸内切酶污染:
Exonuclease III与超螺旋DNA共同孵育后进行琼脂糖凝胶电泳,超螺旋条带无显著降解。
- 于冰上配置如下反应体系
成分 用量 DNA ~5μg 10×Exo III Buffer 5μL (1×) Exonuclease III 0.5μL Nuclease-Free Water 至50μL - 37℃孵育30分钟;
- 加入终浓度为11mM的EDTA以停止反应;
- 热失活条件为70℃孵育30min;
- 建议采用以下步骤回收处理后的样本:
- 使用PCR柱清洁;
- 进行琼脂糖凝胶电泳,然后胶回收DNA;
- 进行苯酚/氯仿萃取,后使用乙醇沉淀。
- 使用PCR柱清洁;
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