产品货号：
BM0303
中文名称：
热启动M-MLV逆转录酶
英文名称：
WarmStart Reverse Transcriptase，RNase H-
产品规格：
10kU
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本制品是通过基因修饰和重组技术克隆表达的RNase H活性缺失型莫洛尼氏鼠白血病毒(M-MLV)逆转录酶，它利用核酸适配体技术，通过共价键作用结合到M-MLV上，能抑制M-MLV在31℃以下的活性，从而提高产物特异性。经过基因工程改造，本酶的最适反应温度提升至50℃，延伸能力更强，可用于较长的cDNA合成。
37℃条件下，以Poly(A)-Oligo(dT)为模板/引物，在10min内，掺入1nmol的[3H] dTTP所需要的酶量定义为1个活性单位（U）。
| 组分 | 规格 |
| 热启动M-MLV逆转录酶(200U/μL) | 50μL |
| 5×M-MLV First Strand Buffer | 500μL |
| 100mM DTT | 100μL |
保存：-20℃
- 宿主原性DNA检测：无宿主DNA污染。
- 核酸内切酶残留检测：将酶液与超螺旋质粒DNA在37℃温育4h，通过DNA电泳检测质粒无变化。
- 核酸外切酶残留检测：将酶液与双链DNA底物在37℃温育16h，通过DNA电泳检测双链DNA底物无变化。
- 第一链cDNA合成
- 于冰上配制如下反应体系：
成分 用量 引物 Oligo(dT)20
或随机引物
或基因特异性引物终浓度2.5μM
终浓度2.5ng/μl
终浓度0.25μM模板RNA 50ng～1μg/20μL dNTP Mix (10mM Each) 1μL Nuclease-Free Water 至13μL - 推荐使用试剂盒提取的已去除基因组DNA污染的高质量RNA作为模板。
- 将以上混合液在65℃温育5min，迅速取出置于冰上冷却1min；
- 向反应混合液中继续加入：
成分 用量 5×M-MLV First Strand Buffer 4μL 100mM DTT 1μL 热启动M-MLV逆转录酶(200U/μL) 1μL 可选：RNase Inhibitor (40U/μL) 1μL - 轻柔吸打混匀后，瞬离；
- 若使用Oligo(dT)20或基因特异性引物，50℃温育30min；若使用随机引物，先25℃温育5min，之后50℃温育30min；
- 反应结束后，85℃温育5min以终止反应；
- 将获得的cDNA溶液置于冰上，用于后续实验。
- cDNA溶液置于-20℃可保存半年；置于-80℃可长期储存。
- 于冰上配制如下反应体系：
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