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LightFlash快速内切酶是一系列经过基因工程重组的快速限制性内切酶，适用于质粒DNA、PCR产物或基因组DNA等的快速酶切。所有LightFlash快速内切酶在通用的CutFlash或CutFlash Color Buffer中都具有优良的活性，能够在5～15分钟内完成酶切。此外，百奥莱博的快速碱性磷酸酶、T4 DNA快速连接酶在CutFlash Buffer中均具有100%活性，支持一管化反应，提升“酶切-修饰-连接”的体验。

CutFlash Color Buffer包括红色和黄色示踪染料，可将产物直接用于凝胶电泳。CutFlash Color Buffer的红色染料与2500bp双链DNA片段在1%琼脂糖凝胶中迁移速率接近；黄色染料与10bp双链DNA片段在1%琼脂糖凝胶中迁移速率接近。

• 功能活性检测：37℃下，在20μL通用CutFlash反应体系中，1μL LightFlash DpnI能够在15min内完全消化1μg pUC19 DNA。
  
• 超长时间温育检测：37℃下，在20μL通用CutFlash反应体系中，将1μL LightFlash DpnI与1μg pUC19 DNA共同温育3h，未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解。更长时间酶切可能出现星号活性。
  
• 非特异性内切酶活性检测：37℃下，在20μL通用CutFlash反应体系中将1μL LightFlash DpnI与1μg超螺旋质粒DNA共同温育4h后，使用琼脂糖凝胶电泳检测，少于10%的质粒DNA转变成缺刻或线性状态。

• 不同DNA中的酶切位点数量

  λDNA	ΦX174	pBR322	pUC57	pUC18/19	SV40	M13mp18/19	Adeno2
  116	0	22	15	15	8	7	87

• 甲基化修饰影响

  Dam	Dcm	CpG	EcoKI	EcoBI
  无影响	无影响	剪切受影响	无影响	剪切受影响

• 在不同反应缓冲液中的活性

  CutFlash Buffer	FastDigest Buffer	CutSmart Buffer	QuickCut Buffer
  100%	100%	100%	100%

• DNA快速酶切流程
  • 在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系：

    成分	质粒DNA	基因组DNA
    ddH2O	15μL	30μL
    10×CutFlash Buffer	2μL	5μL
    底物DNA	2μL (up to 1μg)	10μL (5μg)
    LightFlash DpnI	1μL	5μL
    总体积	20μL	50μL

  • 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴；
  • 37℃温育15min（质粒），或30～60min（基因组DNA）；
  • 80℃温育20min即可使酶失活，停止反应（可选）；
  • 如果使用CutFlash Color Buffer进行酶切反应，得到的产物可以直接进行上样电泳。
• 双酶切或多酶切
  • 每种快速内切酶的用量为1μL，并根据需要适当扩大反应体系；
  • 所有快速内切酶的体积总和不得超过总反应体系的1/10；
  • 如果所用的几种快速内切酶的最适反应温度不同，应先以最适温度低的酶开始酶切，再添加最适温度较高的酶，在其最适反应温度下进行酶切反应。
• 适用于质粒的扩大反应体系

  DNA(μg)	1	2	3	4	5
  LightFlash DpnI(μL)	1	2	3	4	5
  10×CutFlash Buffer(μL)	2	2	3	4	5
  总体积(μL)	20	20	30	40	50

  注：如果总反应体系大于20μL，应适当增加温育时间，尽量使用水浴、金属浴或沙浴。