产品目录

本制品是一种通过特异性标记胶原纤维(可区分I/III型)并结合苏木素复染细胞核的试剂盒。本试剂盒对不同组织的石蜡切片和冰冻切片均适用。

天狼星红(Sirius Red F3B)是一种强酸性阴离子染料，在酸性环境(pH2～3)中，其分子结构中的磺酸基团(-SO₃^-)通过静电作用与胶原蛋白的质子化碱性氨基酸(如精氨酸、赖氨酸)结合，形成稳定复合物，从而特异性标记胶原纤维并呈现红色染色；在偏振光显微镜下，由于不同胶原亚型(如I型粗纤维、III型网状纤维)的分子排列和空间结构差异，天狼星红-胶原复合物产生各向异性双折射现象，I型胶原呈现橙黄/亮红色干涉光，III型胶原显示绿色干涉光，从而实现胶原亚型的可视化区分，同时酸性环境抑制非胶原成分染色，使其成为纤维化疾病、肿瘤间质分析中高特异性且兼具半定量潜力的染色金标准。

胶原纤维由胶原蛋白经过特殊排列而形成，起着重要的结构支持和强度维护的作用，是许多组织的主要成分之一，特别是在结缔组织中广泛存在，根据其组成胶原蛋白的类型，胶原纤维可分为I、II、III、IV型，其中I型胶原纤维为粗大纤维束，主要分布在骨骼、皮肤、肌腱；II型胶原纤维为软骨状纤维，主要分布在关节软骨、玻璃体等；III型胶原纤维为细网状纤维，主要分布在血管、内脏间质；IV型胶原纤维呈基底膜网状结构，主要分布在肾小球基底膜、皮肤表皮-真皮交界处。肌纤维包含有肌球蛋白和肌原纤维，负责肌肉的收缩和运动。各种原因引起的组织细胞损伤，可导致组织细胞发生变性、坏死和炎症反应，损伤较小的情况下可完全恢复正常结构和功能，但如果损伤严重，则会发生纤维化，即纤维大量增生填补组织缺损，却无法恢复正常的结构和功能。通过天狼星红染色可以分析组织中胶原纤维的数量和分布，评估组织的纤维化程度，可用于各种组织病变时对胶原纤维异常变化的研究；同时可结合偏振光区分I型和III型胶原纤维，用于各种纤维化病变的分型和分级研究。

按照使用说明推荐用量，即每张切片使用50μL染色液体系计算，本试剂盒小包装和中包装可分别进行1000次和5000次染色；如果每个切片使用100μL的染色液，则小包装和中包装可分别进行500次和2500次染色。其它用量的情况，相应包装试剂盒的使用次数相应变动。

• 对于石蜡切片样品处理时间的长短视使用溶液的新鲜程度、温度及组织切片的大小而定，避免短时间脱蜡脱水不充分，影响后续染色。
  
• 染色后的分化为选做步骤，但分化后核质着色更清晰。
  
• 样品数量很多时，可以使用百奥莱博的染色架和染色缸，便于操作。
  
• 第一次使用本试剂盒时建议先取1～2个样品做预实验。

• 用户自备：
  
  • 固定液：百奥莱博的免疫染色固定液或PFA固定液(4%)。
    
  • 分化液：百奥莱博的盐酸乙醇分化液(YTB1261、YTB1263、YTB1265)或5%的乙酸溶液或0.5%的盐酸乙醇溶液。
    
  • 如果需要脱水、透明和封片处理，还需自备二甲苯或百奥莱博的环保脱蜡剂，封片剂(如百奥莱博的PVP封片液、抗荧光淬灭封片液或中性树胶等其它封片剂)，及乙醇(80%乙醇、90%乙醇、无水乙醇)。
    
  • 70%乙醇。
• 样品处理：
  
  • 对于石蜡切片：
    
    • 石蜡切片的制备：按照常规方法进行取材、固定、洗涤、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、烘片等步骤制备石蜡切片。
      
    • 二甲苯中脱蜡5～10分钟。推荐使用环保脱蜡剂替代二甲苯进行脱蜡。
      
    • 换用新鲜的二甲苯，再脱蜡5～10分钟。
      
    • 依次浸入无水乙醇5分钟，90%乙醇2分钟，80%乙醇2分钟，70%乙醇2分钟。
      
    • 蒸馏水洗涤2分钟。
  • 对于冰冻切片：
    
    • 冰冻切片的制备：按照常规方法进行取材、速冻、切片、烘片等步骤制备冰冻切片。
      
    • 蒸馏水洗涤2分钟。
• 天狼星红染色：
  
  • 苏木素染色：使用免疫组化笔圈出组织样品，每个组织切片滴加50μL苏木素染色液，染色10分钟，去除染色液，蒸馏水洗涤2分钟。盐酸乙醇分化液分化30秒，自来水流水冲洗返蓝10分钟，蒸馏水洗涤一遍(数秒钟)。
    
    • 根据切片的实际大小情况，可滴加50～200μL的染色液，本使用说明以50μL为例。
  • 天狼星红染色：每个组织切片滴加50μL天狼星红染色液染色10～15分钟，去除染色液，用蒸馏水润洗不超过10秒。
    
    • 对于较易上色组织可把染色时间控制在5～10分钟内，可以根据染色效果适当调整染色时间。
  • 脱水：将组织切片快速依次放入70%、80%、90%乙醇和无水乙醇脱水各10秒，二甲苯透明3次，每次1～2分钟。
    
  • 封片：此时可以直接在显微镜下观察，或使用中性树胶或其它封片剂封片，尽量避免气泡，随后即可在显微镜下观察组织切片。