产品目录

Calcein,AM是一种细胞透性染料，可用于确定真核细胞的细胞活?力。在活细胞中，细胞内酯酶水解乙酰氧甲酯后，非荧光钙黄素AM转化为绿色荧光钙黄素。乙酰氧甲基(AM)的酯衍生物及其螯合剂组成的荧光探针是进行多数活细胞研究时用到的最广泛的化合物。修饰过的羧酸与AM酯基团可以生成不带电荷的分子，具有细胞膜透性。但一进入细胞内，亲脂性的保护集团发生非特异性的水解，从而生成带电荷形式，滞留于胞内。通常情况下，AM酯形式探针为无色无荧光状态，除非发生水解，这一属性对于储存来说，也是非常有用的自发水解的判断标准。

CAS：148504-34-1
分子式：C₄₆H₄₆N₂O₂₃
分子量：994.86
光谱特性：Ex/Em=494/515nm
浓度：1mM in DMSO

组分	规格
Calcein,AM(1mM in DMSO)	100μL
说明书	1份

保存：-20℃，避光，有效期6个月。

1. 适当分装，避免反复冻融。
   
2. 微量液体使用前请旋涡离心，使液体集中于管底。
   
3. 注意避光，操作时注意穿戴防护服及手套。

下面操作可能需要用到的20% Pluronic F-127助溶剂，需另外购买或客户自备。
使用Pluronic F-127助溶剂：
由于某些AM酯在水溶液中不溶解，低毒性的Pluronic F-127常常被用于促进细胞加载染料。这种非离子型的去污剂在在DMSO中的终浓度可以达到20%(w/v)。有时在制备储液时，也会用到Pluronic F-127，40度温和加热可以协助Pluronic F-127溶于DMSO，但Pluronic F-127可以降低AM酯的稳定性，所以，建议最好仅在工作液中使用Pluronic F-127。


这里仅作简单介绍，对于任何特定的染料和细胞类型的操作说明请具体参考相关文献报道或者预实验。

1. Calcein,AM储液用细胞培养基稀释，终浓度我为1～10μM。(一般来说，只要能获得足够的荧光信号即可，尽量选择最小浓度的Calcein AM，减少AM酯的水解副产物，如甲醛和乙酸等物质的富集。)
   
2. 室温15～60分钟的孵育加载时间足够。(但也有研究报道显示37℃的生理温度条件下有更好加载效果。)
   
   1. 必须避免含有氨基酸或者含有伯、仲胺的缓冲液。因为脂肪胺可以促成AM酯的水解而阻止其加载到细胞内，并维持胞外的最低程度的AM酯水解。另外，血清等可能含有内源性酯酶活性的物质也必须避免。
3. 细胞加载完成AM酯后，即可上机检测，可用于荧光显微镜、共聚焦显微镜、流式细胞仪、荧光酶标仪检测，设定激发光为494nm，发射光为515nm。

相关搜索：细胞质绿色荧光染料Calcein,AM，钙黄素，148504-34-1