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细胞骨架蓝色荧光探针图片
产品货号:
KFS144
中文名称:
细胞骨架蓝色荧光探针
英文名称:
ActinBlue
产品规格:
200μL
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价

细胞骨架蓝色荧光探针(ActinBlue)是F-肌动蛋白的高亲和力探针,由蘑菇毒素制成,与蓝色荧光染料偶联。以纳米摩尔浓度使用时,鬼笔毒素是方便的探针,可用于对甲醛固定和打孔的组织切片、细胞培养物或无细胞实验体系中的F-肌动蛋白进行标记、鉴别和定量,比抗体染色更优越。最适合于固定和通透的样本。




荧光标记的鬼笔环肽与肌动蛋白对于不同的物种,包括植物和动物具有几乎相同的高结合属性。鬼笔环肽结合具有高选择性,而F肌动蛋白蓝色荧光。呈现出很少的非特异性染色。本制品可以用于荧光显微镜、微孔板、比色皿。


光谱特性:Ex/Em=350nm/450nm
浓度:200U/mL


组分规格
细胞骨架蓝色荧光探针ActinBlue200μL
说明书1份

保存:-20℃,避光,有效期6个月。


本实验操作不特定针对某一特别的实验体系,但是具有很大的普遍适用性。以下操作以贴壁细胞爬片为例。
注:针对贴壁细胞或96微孔板样本,每个样建议100μL的染色工作液体积,本试剂盒约可操作80 tests。
  1. 甲醛固定细胞
    1. 以预温的PBS,pH7.4,洗涤细胞两次。
    2. 3.7%甲醛(用PBS配置)固定细胞,室温10分钟。注意:甲醇可能导致肌动蛋白扭曲变形,因此最好避免选用任何含有甲醇类的固定剂。
    3. PBS洗涤两遍。
    4. 丙酮-20℃洗涤细胞或者含0.1% Triton X-100的PBS洗涤3~5分钟,以增加渗透性。
    5. PBS洗涤两遍。
    6. (选做)在染色之前,也可以选择用1%BSA的PBS预孵育固定的细胞20~30min,以减少非特异性背景。
    7. 取5μL荧光探针原储液加入200μL的含1%BSA的PBS中预染色每张细胞爬片。
    8. 选择合适的染色液体积,建议100μL,室温浸泡爬片20分钟,可以加上封盖,防止水分蒸发。
    9. PBS洗涤两遍。
    10. 使用DAPI通道观察即可。如需长期保存,细胞应在空气中晾干,加盖在一个永久封固封片剂。避光2~6℃,以这种方式制备的试样保持至少6个月的肌动蛋白染色。
  2. 同时进行固定、促渗和罗丹明鬼笔环肽染色
    该荧光探针在4%的多聚甲醛固定缓冲液中稳定时间较短,需要快速的固定、透化和标记。
    1. 制备1mL含有50~100μg/mL的1-十六酰-sn-丙三醇-磷酸胆碱和3.7%的甲醛的PBS溶液,然后添加5~10units的荧光探针。
    2. 染色液没过细胞,4℃孵育20分钟。
    3. 缓冲液快速洗涤三次。
    4. 封片观察。

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