Ca2+钙离子染色试剂盒

产品货号：

HR8367

中文名称：

Ca2+钙离子染色试剂盒

英文名称：

产品规格：

50T|100T

发货周期：

1～3天

产品价格：

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本试剂盒是利用BalBcellProbe F系列Ca²⁺钙离子荧光探针进行钙离子特异性染色的试剂盒。本试剂盒中的BalBcellProbe F07细胞内钙离子染色探针为橙红色荧光标记的钙离子探针，具有550/581nm的最大激发/发射波长。

BalBcellProbe F07具有极高的细胞渗透性，经过简单孵育即可实现细胞加载。穿透细胞膜进入细胞后被细胞内的酯酶剪切形成不易透过细胞膜的F07新产物，从而被滞留在细胞内。F07游离配体几乎是非荧光性的，其荧光不会随钙离子浓度升高而增强。但是，当它与细胞内钙离子结合后可以产生较强的荧光，荧光会增加60至100倍，被激发后可以发出橙红色的荧光，具有很高的淬灭常数和激发态寿命。最大激发波长为550nm，最大发射波长为581nm。可以使用荧光显微镜、酶标仪、激光共聚焦显微镜或流式细胞仪检测细胞内钙离子浓度的变化。

BalBcellProbe F07荧光探针采用可见光激发，与传统的紫外光激发的荧光探针相比，仪器的适用范围更广泛，具有更强的探针吸收性能，使得更低浓度的探针即可成功检测Ca²⁺变化，从而降低了对活细胞的光毒性，检测敏感度更高。

BalBcellProbe F系列钙离子探针具有多种颜色可以选择，可根据情况对样品进行多色标记实验。除了本试剂盒的橙红色荧光探针，百奥莱博还可以提供绿色、红色等其他颜色的染色试剂盒。

BalBcellProbe F07荧光光谱：
Ca<sup>2+</sup>钙离子染色试剂盒

流式细胞仪、荧光显微镜、激光共聚焦

样本类型

悬浮细胞、贴壁细胞

组分	50T	100T
BalBcellProbe F07 Ca²⁺钙离子染料	50μL	50μL×2
说明书	1份	1份

保存：-20℃，避光，避免反复冻融，有效期6个月。

保存事项

染料短期2周内可以2～8℃保存。染料长期不用可以-20℃保存。避免反复冻融。
染色液A为DMSO溶液，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
有效期为试剂盒未拆封前按要求条件保存的有效期，试剂拆封后请尽快使用完。

仪器准备	荧光显微镜/激光共聚焦/流式细胞仪离心机移液器冰箱冰盒
试剂准备	PBS缓冲液（pH7.4，实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液（1X））（phosphate buffer saline/Dulbecco's PBS：约含8mM Na2HPO4、2mM KH2PO4、137mM NaCl和3mM KCl）或者HBSS（Hank's Balanced Salt Solution；With：Calcium Magnesium Glucose；Without：Phenol Red。Components：CaCl₂(anhydrous) 140mg/L(1.261mM)、MgCl₂-6H2O 100mg/L(0.493mM)、MgSO4-7H2O 100mg/L(0.407mM)、KCl 400mg/L (5.333mM)、KH2PO4 60mg/L(0.441mM)、NaHCO3 350mg/L(4.167mM)、NaCl 8000mg/L(137.931mM)、Na2HPO4(anhydrous) 48mg/L(0.338mM)、D-Glucose 1000mg/L(5.556mM)）
耗材准备	离心管吸头一次性手套

螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
F07染色液为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。
细胞处理需要小心操作，尽量避免人为的损伤细胞。
标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先根据不同的实验要求、细胞类型、细胞的膜通透性等进行优化，确定最佳条件。以下方法仅供参考。
染色后立即进行分析。
本染色液可用于细胞涂片、细胞的检测。
可以在染色溶液中加入等体积的20% Pluronic F127溶液，Pluronic F127可以帮助F07探针更快进入细胞，不建议在Pluronic F127中长期保存F07探针。
由于F07探针在水中的稳定性比较差，染色工作液必须现配现用，并且在当天用完。
F07探针对湿度比较敏感，每次取完需要量后，必须紧紧密封盖子。建议根据单次用量，分装密封保存。不可使用含水的吸头。
染料母液请拧紧螺旋盖，避免受潮失效。

染色工作液的配制
根据样本数量，用37℃培养箱预热的HBSS将BalBcellProbe F07荧光染料200～1000倍稀释，配制成染色工作液。
- 也可以用相应的无血清培养基稀释F07染料至所需浓度。
- 开始实验前，使用HBSS缓冲液或无血清培养基稀释染料储存液到需要的工作浓度。工作浓度应根据不同细胞的预实验结果确定的最佳工作浓度，建议至少在超过10倍范围的浓度下进行测试。一般染色终浓度200～500倍稀释，200～500倍适合大多数细胞样本。
- 建议收到产品后，根据单次使用量，对母液进行小量分装，每次使用一管，试剂-20℃避光冻存，一年稳定。
- 工作液现配现用。
- 为了降低探针加载过度可能引起的假阳性，建议在不影响染色效果的情况下尽量使用低浓度。
- 若细胞在染色后于不含染料的培养基中孵育，荧光信号会衰减。
细胞染色
- 悬浮细胞染色
  - 用PBS洗涤细胞2次。
    - 500×g离心5分钟。根据实验室平时离心细胞的离心力离心。
  - 加入适量体积的染色工作液重悬细胞，使其密度大约为1×10⁶/mL。
  - 在37℃孵育细胞20分钟，不同的细胞最佳培养时间不同。可以用20分钟作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。
    - 若染色不够充分，建议增加染料浓度或延长染色时间。
  - 加入5倍体积的含有1%胎牛血清的HBSS，再继续孵育40分钟。
  - 孵育结束，500×g离心5分钟。
    - 以下步骤均为洗涤细胞。根据实验室平时离心细胞的离心力和时间进行离心。
  - 弃上清液，再次缓慢加入37℃预热的HBSS重悬细胞。
  - 重复5、6步骤两次。
  - 加入HBSS重悬细胞，在37℃下再继续孵育30分钟。
  - 然后用该细胞进行荧光钙离子检测。
- 贴壁细胞染色
  - 用PBS洗涤细胞2次。
  - 细胞培养板中或细胞爬片上加入适量体积的染色工作液。
    - 96孔细胞培养板每孔加入100μL染色液即可。
  - 37℃孵育细胞20～60分钟，不同的细胞最佳培养时间不同。可以用20分钟作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。
    - 若染色不够充分，建议增加染料浓度或延长染色时间。
  - 吸干染色工作液，用HBSS洗培养板或盖玻片2～3次，每次用预热的HBSS覆盖所有细胞，然后吸干培养基。
  - 加入HBSS，在37℃下再继续孵育30分钟。
  - 然后用该细胞进行荧光钙离子检测。
用荧光显微镜或流式细胞仪检测
激发波长为550nm，最大发射波长为581nm。

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