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细胞内质网染色试剂盒是利用E02荧光进行内质网特异性荧光染色的试剂盒。
该探针具有细胞膜透过性，对活细胞内质网具有高度选择性的探针，不像传统的内质网荧光探针，该探针几乎不对线粒体着色，且在较低浓度即可实现对内质网的染色，且对细胞几乎无毒性。
该探针高度结合ATP-敏感型K+通道的磺脲类受体，该受体富集存在于内质网上，因此该探针适合用作内质网荧光探针，E02最大激发波长为483nm，最大发射波长为500nm。
检测方法：
● 荧光显微镜● 激光共聚焦● 流式细胞仪
样本类型：
● 悬浮细胞● 贴壁细胞

产品组成	500T	1000T
组份A：内质网E02绿色探针	250μL	500μL

染料-20℃避光保存，避免反复冻融。有效期6个月。
注：
● 染料短期2～8℃保存，长期不用可以-20℃保存。避免反复冻融。
● 探针为DMSO溶液，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
● 可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。


荧光显微镜/激光共聚焦，离心机，PBS，HBSS（无酚红）


● 螺旋盖微量管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
● E02染色探针液为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
● 用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。
● 细胞处理需要小心操作，尽量避免人为的损伤细胞。
● 标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先根据不同的实验要求、细胞类型、细胞的膜通透性等进行优化，确定最佳条件。以下方法仅供参考。
● 染色后立即进行分析。
● 本染色液可用于细胞涂片、细胞的检测。


1、染色工作液配制：
根据样本数量，用37℃培养箱预热HBSS或PBS或其他缓冲液将E02荧光染料500～1000倍稀释。配制成染色工作液。
注：
● 建议收到产品后，根据单次使用量，对母液进行小量分装，每次使用一管，试剂-20℃避光冻存，一年稳定。
● 工作液现配现用。
● 以下实验方案经牛肺动脉内皮细胞优化，且已被其他常规细胞系验证。但不同细胞类型其最佳使用条件不同，还需用户根据该方案进行进一步优化染色浓度和时间。
2、细胞染色
悬浮细胞染色
1)用HBSS洗涤细胞2次。
注：
● 500×g离心5分钟。
2)加入适量体积的预热的染色工作液重悬细胞。
3)在37℃孵育细胞5～20分钟，不同的细胞最佳培养时间不同。可以用10分钟作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。
注：
● 若染色不够充分，建议增加染料浓度或延长染色时间。
4)孵育结束，500×g离心2分钟。
5)移除上清液，加入37℃预热的培养基重悬细胞。
6)在激光共聚焦显微镜观察细胞。
贴壁细胞染色
1)用HBSS洗涤细胞2次。
2)细胞培养板中或细胞爬片上加入适量体积的预热染色工作液。
注：
● 96孔细胞培养板每孔加入200μL染色液。
3) 37℃孵育细胞5～20分钟，不同的细胞最佳培养时间不同。可以用10分钟作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。
注：
● 若染色不够充分，建议增加染料浓度或延长染色时间。
4)吸干染色工作液，加入新鲜培养基。
5)在激光共聚焦显微镜观察细胞。
3、用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜检测。
激发波长为488nm，最大发射波长为500nm。


● 可以对细胞进行固定吗？
已染色细胞用固定后，仅部分荧光探针留在细胞内，荧光信号会有部分衰减。
● 固定细胞的方法？
用4%甲醛于37℃固定细胞2min。细胞固定后，可用合适缓冲液进行清洗，每次5min，共2次。清洗后可对细胞进行后续封片、镜检或进一步染色。
● 可以对细胞进行透化处理吗？
不建议对细胞进行透化处理，因为经Triton X-100或其它透化剂透化后，细胞内将无荧光信号保留。
相关搜索：内质网染色试剂盒(绿色荧光)