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钙盐染色液(多色亚甲蓝法)采用茜素红S和多色亚甲蓝结合染色，骨质和茜素红结合形成红色沉淀，软骨与多色亚甲蓝反应呈紫色，细胞质呈黄色，胞核蓝色，此法为6～8个月胎儿指骨最佳染色法。该试剂仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

钙在人体内大量存在，构成骨骼作为支持人体的支架，在分泌、运送、肌肉收缩、神经传导等也起重要作用。钙在机体内以两种形式存在，一种是离子钙，存在血液循环内，即所谓血钙；另一种是结合钙，和蛋白、碳酸或磷酸结合而沉着在组织内。除骨骼和牙齿外正常时钙渗透在所有组织和细胞中，一般不以固体状态出现在组织内，但在某些情况下钙析出成固体并沉着于组织内，则为病理性钙盐沉着。沉着的钙盐主要是磷酸钙，其次为碳酸钙，钙盐通常是单折射的，但草酸钙是双折射的。当使用HE染色时钙一般呈紫蓝色，许多染料可以与钙形成螯合物，包括茜素红S、红紫素、核固红等；一般来说这些染料在识别中至大量的钙时，效果优于轻微染色的微量钙沉积，但茜素红S往往对少量的沉积物可得到更可靠的结果。钙盐染色常用方法有硝酸银法和茜素红S法。

• Helly固定液、系列乙醇、蒸馏水、二甲苯或bjbalb脱蜡透明液、中性树胶
  
• 显微镜、恒温箱

• 在不溶性钙染色中茜素红S的染色时间要根据钙盐的含量来确定，应在显微镜下观察，直到着色反应强烈而不弥散为止。
  
• 经过茜素红S染色液染色后，钙沉积物是双折射的。
  
• 多色亚甲蓝染色液易挥发，染色时应减少接触空气。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• 未脱钙骨组织固定于Helly固定液，塑料包埋，室温过夜，37℃烤箱中聚合2～4天，-20℃冰箱冷却15～20min。切片厚度3～5μm，脱塑至水，蒸馏水洗。
  
• 入茜素红S染色液染色10～60min，蒸馏水稍洗。入95%乙醇58℃洗3～5min。
  
• 入多色亚甲蓝染色液复染3～6min，95%乙醇分色至染色清晰。
  
• 常规脱水，二甲苯或脱蜡透明液透明，中性树胶封固。