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正常精子核约占其头部的65％，由结合蛋白的DNA构成，本试剂盒的作用原理是荧光染料吖啶橙与双链DNA结合发出绿色荧光，与单链DNA结合后可发出红色或黄色荧光，通常有双链DNA的精子才能有受精能力。

• 蒸馏水、新鲜精液样本
  
• EP管或离心管、恒温箱、防脱载玻片

• 蒸馏水冲洗载玻片时要注意控制水流速度，以免洗脱涂片区内的精子。
  
• 甩去多余水分，应防止涂片过于干燥。
  
• 配制的AO染色工作液应即配即用，不宜久置，否则荧光会衰减，如果荧光明显衰减可提高AO染色液∶AO Buffer=1∶4配制比例，以达到较好的效果。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• 取新鲜精液标本，置于恒温箱37℃或常温放置，至完全液化。
  
• 取上述液化精液0.2～0.5mL置于EP管，再加入1～1.5mL洗涤液，用吸管或移液器反复吹打数次，室温2000rpm离心5～10min，弃去上清液，保留管底精子沉淀团，重复操作1～2次。
  
• 向精子沉淀加入洗涤液约0.05～0.2mL，制成混合精子悬液。
  
• 取上述已制备好的精子悬液15～100μL，均匀涂布于防脱载玻片，自然干燥。
  
• 在涂片区内滴加固定液2～3滴，室温固定10～15min，蒸馏水稍洗，并甩去多余水分。
  
• 配制AO染色工作液：按AO染色液∶AO Buffer=1∶4的比例混合，即为AO染色工作液，注意该工作液应即配即用，不宜久置。
  
• 在涂片区内滴加AO染色工作液2～4滴，室温染色5min，蒸馏水稍洗，并甩去多余水份。
  
• 吹干或晾干玻片，滴加2～4滴抗荧光淬灭封片剂，荧光显微镜下观察。